青光安颗粒剂对自发型青光眼小鼠房水动力学的影响及机制研究

Intraocular pressure is a major factor for glaucoma pathology.Continuing reduce IOP is the only effective measure to prevent visual loss of glaucoma patients. In clinical,lowering intraocular pressure include:inhibition of aqueous humor production,increased scleral outflow channel and hypertonic agents.Disadvantages of oral preparations are fewer species and side effect of long-term used. In chinese medicine,the reserch of glaucoma were focus on optic neuroprotection,study of aqueous humor dynamic was rarely involved. . In humans,75% of the resistance to aqueous humor outflow is localized within the TM with the juxtacanalicular portion of the TM being the main site of outflow resistance.Many studies have focused on this mechanism.. Based on good application in clinical for many years,QingGuangAn worthy for further investifation.Our study will to reserch the relationship between decreased outflowfacility and the changes in hydrodynamic aqueous outflow pattern and morphology after treatment of QingGuangAn in spontaneity glaucoma of mice eyes.The combination of outflow of aqueous humor fluid dynamics and morphology is a novel method to reserch mechanism of Chinese medicine for treatment of glaucoma.

眼压升高是青光眼的主要病理因素，持续有效的降低眼压仍是目前阻止和延缓青光眼患者视功能进一步丧失的唯一有效措施。临床上降眼压药物以抑制房水生成、增加巩膜通道流出、高渗剂为主，口服制剂品种局限且长期使用副作用大。国内的中医药抗青光眼的研究，多集中在视神经保护机制方面，极少涉及房水动力学研究。.　　　房水动力学影响因素中，经小梁途径的房水引流起了相当重要的作用，目前的多数研究已将小梁网外流途径中产生房水外流阻力的主要部位定于小梁网（TM）及邻管组织和Schlemm氏管内壁这一区域。.　　　青光安在临床应用多年，对青光眼有良好疗效，值得进一步研究。本课题拟通过自发型青光眼小鼠模型,利用前房灌注系统研究青光安颗粒剂在TM、SC管内壁和邻管组织处的房水外流的动力学及相关形态学改变。建立阻抗谱芯片实时观测干预后的小梁网细胞活性变化，结合分子生物学分析,对中药复方是如何治疗青光眼的机理进行研究。

背景：研究表明青光眼的眼压增高与转化生长因子-β（TGF-β）促进小梁网细胞外基质的堆积，增加房水流出阻力和黏附分子CD44导致房水排除阻力增加有关。传统中药青光安颗粒剂是中医临床上常用的降眼压药物，其降眼压作用是否通过小梁网通路的机制尚不清楚。研究内容：选取10只眼压正常的3月龄雌性DBA/2J小鼠作为对照组，采用随机数字法将20只眼压自发性升高的9月龄DBA/2J小鼠随机分为高眼压组和青光安组，青光安组小鼠采用2.5 g/kg复方青光安颗粒剂灌胃，每天2次，连续15 d，对照组和高眼压组小鼠以相同量蒸馏水灌胃。采用经前房注入/抽吸系统进行眼压测量，分别以2.5、5.0 μl/min的速率继续进行灌注，计算房水流畅系数（C）值和房水流出阻力（R）值。将3月龄DBA/2J小鼠60只按随机数字表法分为高剂量青光安组、中剂量青光安组、低质量青光安组和空白对照组，给药后7 d麻醉下提取各组小鼠含青光安药物血清和空白对照动物血清，然后收集各组小鼠含小梁网巩膜组织进行培养，采用纤连蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫组织化学染色鉴定小梁网细胞。采用终质量浓度为0、5、10、20、50和100 ng/ml的TGF-β处理小梁网细胞24 h，用MTT比色法检测各组细胞活性；用不同质量浓度含药血清培养经20 ng/ml TGF-β处理的小梁细胞，分别于培养后24、48和72 h采用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β受体质量浓度，采用Western blot 法检测各组小梁网细胞中CD44蛋白的相对表达量。结果：高眼压组小鼠眼压值明显高于青光安组和对照组，与高眼压组比较，青光安组小鼠C值明显降低。与空白对照组比较，TGF-β组小梁网细胞上清液中TGF-β受体质量浓度和细胞中CD44蛋白相对表达量均明显升高；细胞培养后24、48和72 hTGF-β+高剂量含药血清组细胞上清液中TGF-β受体质量浓度和细胞中CD44相对表达量均明显低于TGF-β组和TGF-β+低剂量含药血清组，差异均有统计学意义（均P<0.01）。意义：青光安颗粒剂通过影响房水动力学因素达到降低青光眼眼压的作用。青光安含药血清能明显降低体外培养的鼠小梁网细胞中TGF-β2受体和CD44的表达。