PUMA在慢性胃炎癌性转化中的作用及其参与相关信号通路的机制研究

The mechanisms of transformation from inflammation to cancer induced by helicobacter pylori are still unclear. As a master regulator of inflammatory reponses, transcription factor NF- ?B activation and modulation by H.pylori has been topics of great interest to many investigators. But little is known regarding whether NF- ?B termination signals could also be targeted for H.pylori to maintain sustained NF- ?B activation and inflammation. NF- ?B is one of the transcription factors of PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis), and the role of PUMA in gastric carcinogenesis is still poorly understood. Our previous studies have shown that: 1st, PUMA expression is high in human chronic atrophy gastritis with intestinal metaplasia and gastric cancer tissues which are infected by CagA positive H. pylori; 2nd, H. pylori can upregulate PUMA level on gastric cancer cells; 3rd, NF- ?B can regulate PUMA expression. Therefore, we present hypothesis that We intend to verify this hypothesis via in vitro and in vivo experiments based on specimens of patients with gastritis and gastric cancer, tumor-bearing mice and gastric cancer cells. Our research would elucidate the role of PUMA in gastric carcinogenesis and regulatory mechanism by NF- ?B, therefor provide theoretical information for targets on prevention of gastric cancer.

幽门螺旋杆菌（H.P.）诱导慢性胃炎癌化的机制至今未明，作为炎症关键调控因子的转录因子NF-?B在此过程中的作用已有较多阐述。而有关传递NF-?B效应的下游通路的研究却鲜有报道。NF-?B是PUMA（P53上调凋亡调控因子）的转录因子之一，而PUMA在胃癌发生中的作用未明。我们前期研究表明：①PUMA在人体CagA+ H.P.感染的慢性萎缩性胃炎和胃癌组织中表达明显升高；②在胃癌AGS细胞中H.P.可上调PUMA；③NF-?B可调控PUMA表达。我们提出假说：PUMA是H.P.诱导慢性胃炎癌变中传递NF-?B功能的重要下游分子。本项目拟以胃炎和胃癌患者标本、荷瘤小鼠、胃癌细胞为研究对象，应用体内外功能学实验从分子、细胞和整体三个层面对此假说进行验证，阐明PUMA在胃癌发生中的作用及其受NF- ?B调控的机制，为胃癌发生的预防提供理论依据。

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori, H.P.）与胃癌的发生有十分重要的关系，其所诱导的胃炎是部分患者发生胃癌的第一步。NF- ĸB在H.P.所致的胃炎中发挥关键作用，有关NF- ĸB下游的信号分子可否作为终止其持续激活所致炎症的靶标却知之甚少。作为NF-kB下游关键分子的PUMA在胃炎中的作用尚未知，本课题旨在研究PUMA在H.P.阳性的胃炎发病中的作用。.（1）研究H.P.+人胃炎组织的PUMA表达和凋亡表达情况.我们检测了H.P.+ 胃炎组织中PUMA mRNA和蛋白表达水平。可以看到，相较于胃炎组织，正常胃组织中PUMA表达非常低，几乎未见阳性信号，而胃炎组织中可见在胃腺体的胞浆中有较为强烈棕色的阳性信号，提示PUMA在胃腺体的胞浆中高表达。免疫荧光也提示PUMA在胞浆中高表达。我们采用Western blot 和荧光定量PCR方法检测人正常胃粘膜组织和胃炎组织中PUMA的mRNA和蛋白表达水平，均提示胃炎组织中PUMA mRNA水平较正常组织明显升高，两者相比有统计学差异。TUNEL检验结果亦提示，胃炎组织中腺体中凋亡较多。.(2)探讨PUMA在H.P.诱导小鼠慢性胃炎发生中的作用。.H.P.处理小鼠不同时间段，胃粘膜PUMA表达增高。我们将H.P.作用于小鼠2月以诱导胃炎模型，HE染色发现正常小鼠胃部炎症明显，而puma-ko小鼠炎症明显减轻。在炎症发生过程中，作为主要腺体成分的主细胞也会发生变化。野生型小鼠经H.P.处理24小时后，在腺体的底部有少量主细胞的存在，而在PUMA KO小鼠中，胃腺体的主细胞较野生型明显增加，并向腺体上部迁徙。.（3）在细胞模型上探讨H.P.诱导PUMA表达的机制。不同P53状态的胃癌细胞中使用H.P.处理后均可见PUMA表达上升，说明H.P.诱导的PUMA表达不依赖P53。H.P.处理60小时后野生型AGS细胞凋亡明显增加（P<0.001），而PUMA-KO AGS细胞仅有少量凋亡，caspase激活也较野生型轻。同时我们实验证明，H.P.通过经典途径激活P65诱导PUMA表达。.NF-κB是多种生理和病理功能的重要中枢节点，阻断NF-κB会导致较为严重的副反应。其可作为胃炎治疗的潜在靶点，有望成为高效低毒的临床药物。