应用中医"子午流注"理论对急性心肌梗死发作昼夜节律调控机制的研究

卯时(5点至7点)是急性心梗(AMI)高发时段，此时骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)水平恰好处于低谷，根据中医"子午流注"理论，卯时正是肾经最虚的时候，我们已证实，肾虚会导致EPCs数量显著降低，因此推测节律基因调控下EPCs减少可能是AMI卯时高发的主要原因。为此，本课题拟探讨①卯时发作的AMI与EPCs数量和功能及节律基因Per2之间的关系；②为排除骨髓外干扰，将两组清髓后的C57小鼠分别尾静脉注射C57和Per2-/-小鼠的骨髓干细胞进行骨髓重建，建立MI模型，检测骨髓和血液EPCs数量、心功能及组织学变化，以探讨Per2调控EPCs的作用；③在EPCs中进行Per2过表达和干扰，检测EPCs生物学功能，应用组织病理学和分子生物学技术检测Per2、PI3K、Akt和pAkt的表达，揭示Per2调控EPCs的分子机制。本研究将阐明AMI发作昼夜节律的机制，为提高AMI的预警水平提供依据。

研究背景：心肌梗死的发生相比于其他时间更容易出现在上午6点左右，并且研究还发现凌晨发生的心梗其梗死面积都要明显大于一天当中其他时间。可见，心肌梗死的发生和发展与时间节律有着密切的关系。. 我们进行小鼠基因型的鉴定、观察Per2基因敲除对心梗后心功能、心梗面积的影响、Per2基因敲除对心梗后骨髓内皮祖细胞动员及功能的影响、Per2基因敲除对心梗后骨髓内皮祖细胞动员及功能的机制研究、Per2基因敲除对外周血内皮祖细胞的数量的节律及功能的影响、Per2基因敲除影响内皮祖细胞功能的机制研究。结果显示，Per2基因敲除小鼠心功能低于野生型心梗小鼠，心梗面积增大；Per2基因敲除小鼠心梗后骨髓动员数量低于野生型小鼠；缺氧状态下，per2基因敲除内皮祖细胞的功能低于野生型内皮祖细胞；Per2基因可能通过ERK及Akt信号通路影响心梗后骨髓内皮祖细胞的骨髓动员；Per2基因敲除小鼠外周血内皮祖细胞数量的节律性消失；常氧状态下的功能明显低于野生型小鼠内皮祖细胞, Per2基因是通过PI3K/Akt信号通路及CXCR4表达影响内皮祖细胞的功能；Per2-/-内皮祖细胞治疗心梗后血管新生功能明显弱于野生型内皮祖细胞；Per2-/-内皮祖细胞治疗心梗后心功能明显低于野生型内皮祖细胞。. 研究节律基因per2敲除对心肌梗死的影响及相关机制，对于揭示临床上生物节律紊乱增加心血管事件的发生率尤其是心肌梗死的发生率有着重要的指导意义。心梗多发生于凌晨，而外周血内皮祖细胞的数量在凌晨处于低谷，内皮祖细胞的数量和功能与侧支循环的形成数量呈正相关。通过研究发现，per2基因可能是部分通过影响骨髓和外周血内皮祖细胞的数量和功能调节心肌梗死发生的节律性。