活性维生素D3及其受体在调控糖尿病肾小管肾素-血管紧张素系统中的作用

肾素-血管紧张素系统（RAS）在糖尿病肾病的发生发展中发挥重要作用。近年来有研究显示，活性维生素D3 可以通过抑制肾小球RAS保护肾脏。但关于活性维生素D3对糖尿病状态下肾小管RAS各组分的影响，目前尚无相关文献报道。本研究通过动物实验，制备糖尿病大鼠模型，利用目前国际上先进的激光微分离系统，精确分离肾小管，观察活性维生素D3对糖尿病大鼠肾小管RAS及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核因子（NF）-κB活性的影响。并在体外实验中通过对MAPK各亚型和NF-κB的特异性阻断，进一步明确MAPK/NF-κB通路在介导活性维生素D3调控肾小管上皮细胞RAS中的作用。同时应用针对维生素D受体（VDR）的siRNA，在细胞水平阻断了VDR的表达，观察活性维生素D3对高糖状态下近端肾小管上皮细胞RAS的影响以及VDR在其中的作用，以期深化对糖尿病肾病发病机制的认识，并探讨针对糖尿病肾病新的治疗手段。

糖尿病肾脏病（DKD）已经成为导致终末期肾病的重要原因之一。肾素-血管紧张素系统（RAS）的过度激活是DKD发生进展的核心因素。近年来有研究显示，活性维生素D3 可以通过抑制肾小球RAS保护肾脏。但关于活性维生素D3对糖尿病状态下肾小管RAS各组分的影响，目前尚无相关文献报道。本研究通过动物实验，制备糖尿病大鼠模型，利用目前国际上先进的激光微分离系统，精确分离肾小管，观察活性维生素D3对糖尿病大鼠肾小管RAS各组分（RENIN，AGT，ACE，ACE2，AT1，AngⅡ）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核因子（NF）-κB活性的影响。并在体外实验中通过对MAPK各亚型（P38MAPK、ERK1/2，JNK1/3）和NF-κB的特异性阻断，进一步明确MAPK/NF-κB通路在介导活性维生素D3调控肾小管上皮细胞RAS中的作用。同时应用针对维生素D受体（VDR）的siRNA，在细胞水平阻断了VDR的表达，观察活性维生素D3对高糖状态下近端肾小管上皮细胞RAS的影响以及VDR在其中的作用。动物实验结果显示：活性维生素D3对实验性糖尿病大鼠肾小管间质病变具有保护作用（降低蛋白尿、升高肾小球滤过率、改善肾脏病理损伤）。与对照组相比较，糖尿病组大鼠肾小管间质RENIN、AGT、ACE、ACE2、ERK1/2、P38MAPK表达、NF-κB活性及AngⅡ水平明显升高，活性维生素D3组上述指标除ACE2表达升高外，其余均降低。JNK1/3、AT1各组表达无统计学差异。细胞实验结果同动物实验部分：高糖上调大鼠肾小管上皮细胞（HK-2）RENIN、AGT、ACE、ERK1/2、P38MAPK、NF-κB、AngⅡ的表达、下调ACE2表达。骨化三醇通过VDR受体部分逆转上述指标的变化。ERK1/2抑制剂FR18020和P38抑制剂SB203580可抑制RAS和NF-κB活性；NF-κB抑制剂PDTC可抑制RAS，但对MAPK无影响；JNK1/3抑制剂SP600125对RAS、NF-κB活性均无影响。上述结果提示活性维生素D3可能通过ERK1/2/NF-κB、P38MAPK/NF-κB信号通路抑制高糖诱导HK-2细胞RAS激活。本研究成果必将深化对DKD发病机制的认识，并为临床延缓其进展提供了新的治疗方案。