LAPTM4B新基因启动子多态区转录因子的作用及其与肿瘤易感性的关系

LAPTM4B是从肝癌组织克隆到的新基因。研究表明，它与肝癌的发生发展密切相关，在肝癌中的高表达并非由基因扩增引起。我们的研究发现，该基因启动子区域存在着二种多态性，可以指导编码二种不同的蛋白质,该区含有几种转录因子的结构域。它在肝癌中较正常人明显高表达，这可能与启动子区的多态性和转录调节有关。为了探索其机理，本课题从肝癌及乳腺癌中LAPTM4B基因启动子的多态性入手，通过对肝癌和乳腺癌细胞及临床肿瘤DNA样品进行启动子区的PCR和测序结合临床资料等分析，明确不同等位基因与肿瘤易感性的关系，同时进行启动子区序列和结构域分析，以删除或增加结构域区的重组体，转染肿瘤细胞株，并以特异阻断剂和芯片等技术，分析与多态位点结合的关键转录因子，这会明确它们在转录调控中的作用，对LAPTM4B蛋白表达的调节，揭示其在肿瘤发生发展中的作用机制具有重要意义，是筛选新的肿瘤分子标志物的重要基础

LAPTM4B是从肝癌组织克隆到的新基因，启动子区域存在着二种多态性，这可能与启动子区的多态性和转录调节有关。为了探索其机理，本课题从肝癌及乳腺癌中LAPTM4B基因启动子的多态性入手。首先研究LAPTM4B基因多态性与原发性肝癌易感性的关系，对303例原发性肝癌病人和515例正常人血液标本DNA，通过基因分型鉴定，发现LAPTM4B*1/2 和 *2/2个体患原发性肝癌的危险性相对于*1/1要显著增高(OR分别为=1.898和2.483)。肝癌的发病风险比*1等位基因高1.652倍。证明了LAPTM4B *1/2和 *2/2与原发性肝癌的易感性相关。.二是研究LAPTM4B基因多态性与乳腺癌易感性的关系，对732例乳腺癌病人与649例正常人血标本DNA，鉴定LAPTM4B的基因分型。结果表明LAPTM4B*1/2 和 *2/2个体患乳腺癌的危险性相对于LAPTM4B*1/1要显著增高(OR分别为1.387 和1.592)。LAPTM4B*2等位基因在病例组和对照组中的频率也存在显著差异(分别为32.1%和26.5%)，乳腺癌的发病风险比*1等位基因高1.301倍。.我们构建了LAPTM4B基因启动子和转录区报告基因新载体。转染了肝癌细胞系BEL-7402以及乳腺癌细胞系MCF-7等，来确定不同转录区的活性。实验证明启动子的 +10 ~ +292 区是该启动子的核心区，其转录活性在不同细胞中不同，如其活性在MCF7, T-47D 和 ZR-75-1细胞中分别是22%, 184%, 89% 。通过对乳腺癌MCF-7细胞等， 应用凝胶迁移实验发现该作用元件CREB1可以结合到LAPMT4B的启动子区；当引入突变体后，转录活性减少了50%。在LAPTM4B *2 型等位基因的活性明显低于*1型。 利用RNA干扰试验LAPTM4B mRNA随着CREB1蛋白水平同步减少。实验证明CREB1能够对LAPTM4B基因的转录进行有效调控。. 本研究明确了LAPTM4B基因转录活性的最强区域位于+10 ~ +292，证明了CREB1对LAPTM4B转录的正调控作用，明确了LAPTM4B两种等位基因型中CREB1转录活性的差别。本研究对明确LAPTM4B在肿瘤细胞中高表达的机理具有重要意义，为LAPTM4B的进一步研究及其作为肿瘤标志物应用于临床奠定了理论基础。