细胞填充床反应器亲和筛选中药抗肿瘤活性成分

采用超临界二氧化碳法制备纳米羟基磷灰石/壳聚糖/丝素蛋白复合细胞支架材料。利用该多孔支架制成细胞填充床生物反应器，在满足肿瘤细胞生长和维持肿瘤细胞活性所需的生理条件下，三维立体培养肿瘤细胞；在模仿体内药物与肿瘤细胞受体作用的环境下，亲和吸附筛选中药中的活性成分；同时将从肿瘤细胞结合靶点洗脱下来的活性成分固相萃取于富集柱中，对活性成分进行富集。进一步建立细胞填充床反应器-高效液相色谱/质谱（CPBBR-HPLC/MS）在线亲和筛选分析系统，实现肿瘤细胞三维立体培养、中药活性成分细胞亲和筛选、分离富集、成分分析与化合物结构鉴定的集成。应用该系统于石榴提取物中与肿瘤细胞作用的活性成分筛选分析研究，结合体外抗活性试验，筛选得到具有抗肿瘤药效的药物单体或先导化合物。该研究旨在发展一种化学物质分离模式、创建中药复杂体系中具有某种特定生物亲和作用的活性成分组的有效筛选和选择性分析方法。

制备了胶原蛋白/丝素蛋白/纳米羟基磷灰石和纳米羟基磷灰石/壳聚糖/丝素蛋白两种复合细胞支架材料，并利用前者制成了细胞填充床生物反应器，建立了在满足肿瘤细胞生长和维持肿瘤细胞活性所需的生理条件下，进行三维立体培养肿瘤细胞和中药活性成分细胞亲和吸附筛选模型；进一步建立了细胞填充床反应器-高效液相色谱/质谱（CPBBR-HPLC/MS）在线亲和筛选分析系统，成功将实现了太白“七药”朱砂七中能够与LoVo 肿瘤细胞作用的活性成分筛选分析。 该研究证实了利用三维立体培养肿瘤细胞进行药物筛选分析的可行性，为后续进一步研究奠定良好的基础。此外，本课题还建立了微波辅助一步提取衍生化快速分析中药中脂肪酸轮廓和一些中药活性成分提取分析的新方法。本课题及相关研究已发表论文6篇，授权发明专利两项。