HCRP1负调控EGFR在乳腺癌细胞增殖、迁移和耐药逆转中的作用及机制

Chemorefractory is one of the leading cause of breast cancer treatment failure. We found that EGFR, a membrance receptor, promotes the capability of proliferation and migration in adriamycin resistant breast cancer cells, moreover, it plays an important role in regulating the cell cycle and consequently inducing the multidrug resistance in breast cancer. How to reverse the multidrug resistance and regain the sencitivity to chemodrugs is an urgent problem needs to be solved in clinical work. HCRP1 is recently found loss of expression in hepatocyte and ovarian carcinoma and mediated the drug resistance to cetuximab, a monoclonal antibody to EGFR, besides, as a member of ESCRT-I, it regulated the degradation of membrance receptor via protein sorting procedure. Based on our prior results and latest literature, we speculated that HCRP1 negatively influenced the expression of EGFR, and this regulation is probably associated with the chemodrug resistance in breast cancer. In this study, plasmid transfection, RNA interfer, tissue microarray and mass spectrographic analysis etc will be used to tesitify the function and molecular mechanism of HCRP1-EGFR pathway in human breast cancer cell lines and clinical resection samples, as well as animal experiment, to provide a strong evidence and theoretical basis in in clinical breast cancer treatment and research.

化疗耐药是导致乳腺癌治疗失败的重要原因之一。我们的早期研究发现膜受体EGFR不仅促进了阿霉素耐药乳腺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力，并且通过诱导细胞周期的改变介导了乳腺癌细胞对化疗药物耐药的产生，如何逆转肿瘤耐药成为一个亟待解决的临床问题。作为ESCRT-I家族的成员，HCRP1能够通过分选调节膜受体的降解，最近有报道HCRP1在肝癌和卵巢癌中表达缺失，并且与后者对EGFR靶向抗体西妥昔单抗耐药产生有关。本项目基于既往研究结果和文献分析，提出"HCRP1负调控EGFR基因的表达"的观点，推测HCRP1-EGFR途径可能与乳腺癌的化疗耐药密切相关。研究采用质粒转染、RNA干扰、组织芯片及质谱分析等技术，以人乳腺癌细胞株和乳腺癌标本为研究对象，从细胞、组织和动物实验三个水平检测HCRP1对EGFR的调控，并探讨其在介导乳腺癌增殖、迁移和化疗耐药逆转中的作用机制，为乳腺癌治疗和研究提供理论基础。

肝细胞癌相关蛋白1（HCRP1）在多种实体瘤中表达缺失，并且与较差的预后相关，本研究的主要目的即探讨HCRP1在乳腺癌中的表达并观察其与表皮生长因子受体（EGFR）和预后相关因素的关系，并观察HCRP1对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。. 首先，我们采用免疫组织化学和Western blot方法分别检测了194例乳腺癌石蜡标本和中19对乳腺冰冻标本中癌与癌旁组织HCRP1的表达，并分析HCRP1的表达与主要临床病理参数间的关系，并进一步在细胞系中观察HCRP1和EGFR的表达水平。其次，利用HCRP1 siRNA和HCRP1/pcDNA3.1A转染技术在不同转移潜能的乳腺癌细胞中分别敲除或增强HCRP1的表达，用transwell侵袭小室实验检测干扰后的乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的改变。再次，我们在T47D/con和T47D/HCRP1 siRNA细胞分别加入EGF和EGF抑制剂培养后观察HCRP1和EGFR表达的改变。最后，我们进一步在裸鼠体内验证HCRP1对乳腺癌细胞侵袭的调控作用。. HCRP1的表达与年龄(P = 0.001)、组织学级别 (P= 0.005)、肿瘤演进(P = 0.013)和死亡 (P = 0.001)，但是与肿瘤大小、淋巴结转移状态和Ki67的表达无关。Kaplan-Meier生存曲线显示HCRP1低表达与生存时间延长密切相关(P < 0.001)，并且单因素和多因素生存分析都发现HCRP1、肿瘤大小、淋巴结转移状态和人表皮生长因子受体-2（HER-2）均为独立的预后因子(均P < 0.05)。另外，HCRP1表达降低多发生于三阴性乳腺癌中(TNBC; 63.89%)，远远高于腔上皮型(16.95%)和HER-2过表达型(7.5%; P < 0.001)，并且在TNBC组中亦观察到HCRP1低表达和生存时间增长密切相关(P < 0.004)。除此之外，在全部病例中我们发现HCRP1和EGFR的表达呈负相关(P <0.001)，在各个基因表型分组中亦如此(P < 0.05)。另外，我们发现HCRP1过表达可以显著抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移，并且，HCRP1缺失可以阻断EGFR的降解并且导致西妥昔单抗的耐药。. 我们的研究结果显示HCRP1的表达下调在乳腺癌中是一个独立的预后因子，并且参与介导了EGFR的降解，可能作为一个新的治疗靶点。