mir-125b在1型糖尿病自身免疫性胰岛炎中的作用及机制研究

1型糖尿病（T1D）以自身免疫性胰岛炎为特征，近来研究发现包括mir-125b在内的7种miRNA参与免疫调节和自身免疫疾病，但在T1D中作用尚不清楚。申请人利用T1D动物模型NOD小鼠，基因芯片筛查miRNA变化谱，发现mir-125b存在表达异常，其变化和自身免疫性胰岛炎的发展有相关性，表明mir-125b可能参与T1D胰岛炎的发生和发展。最近研究报道TNF-α是mir-125b的直接靶基因，因此我们推测mir-125b可能通过TNF-α及其受体信号通路对β细胞凋亡进行调控。我们的目的就是以此为切入点，研究mir-125b与1型糖尿病β细胞凋亡的关系，明确mir-125b在1型糖尿病自身免疫中的作用。此研究除对阐明T1D发病机制具有较高理论价值外，还将为寻找T1D新的治疗靶点提供帮助。

1型糖尿病（T1D,IDDM）表现为自身免疫性胰腺炎为特征的胰岛β细胞破坏，近来研究提示miRNA可能在T1D的发病中起重要作用。本研究首先采用miRNA芯片分析NOD小鼠胰腺中miRNA表达变化谱，筛查T1D相关miRNA。结果在聚类分析中，无胰岛炎归为一类，中度和重度胰岛炎两组归为一类，表明miRNA表达在胰岛炎存在显著变化。对已经报道的7个免疫相关miRNA单独分析，发现免疫相关miRNA中，6种无明显变化，但我们发现凋亡相关基因miR-125b显著表达下调并有相应变化模式，结果经qRT-PCR验证。NOD小鼠miR125b随胰岛炎进展存在下调趋势，同时与BALB/c小鼠相比，NOD小鼠胰腺miR-125b下调。提示miR-125b参与调节胰岛炎胰岛细胞凋亡。. 在随后的体外功能实验中，我们首先利用棕榈酸（PA）处理建立胰岛细胞系（NIT-1）凋亡诱导模型，在PA浓度0.5mM时，NIT-1凋亡率约40%。Western Blot证实凋亡时Bax、Bmf、Bak表达上调，而Bcl-2表达上调。同时采用Taqman RT-PCR检测发现miR-125b随凋亡诱导而上调。采用miR-125b对应mimics 及 inhibitor瞬时转染nit-1，发现mimics转染促进凋亡，而inhibitor转染抑制凋亡。构建mir-125b稳转细胞株，0.5mM PA诱导凋亡，48h后提取蛋白质。发现miR-125b抑制bak的表达，进而下调凋亡蛋白细胞色素c和caspase-3 的表达，从而起抑制细胞凋亡的作用。生物信息学分析发现Bak是miR-125b预测靶基因，目前双荧光素酶报告实验初步完成，初步证实Bak是miR-125b靶基因。进一步的机制分析在完善中。. 目前已经在ISRN endocrinology杂志发表文章一篇（pubmed central和CA Chemical Abstract收录），在中华糖尿病杂志修回一篇即将发表。体外实验论文撰写中，拟近期投稿diabetes obesity & metabolism （SCI）。