糖皮质激素影响HBV特异的CD8+T细胞免疫应答及其机制研究

Glucocorticoid has been used for severe hepatitis therapy in clinical for many years, but the effectiveness is controversy, hence explore the effect of glucocorticoid on HBV specific T cell immune response is urgent. T cell mediated liver immune pathogenesis is major factor of severe hepatitis. Glucocorticoid as immune suppressor selectively effect on T cell, reduce T cell number and activity. According to our previous data and literature report, we hypothesis glucocorticoid can inhibit HBV antigen processing, presentation, and CD8+T cell activation and proliferation, finally leading to CD8+T cell exhaustion and apoptosis. To address this hypothesis, we plan to establish a HBV antigen present cell and HBV specific CD8+T cell co-culture system in vitro and combined clinical immune analysis of severe hepatitis before and after therapy with glucocorticoid to explore the effect of glucocorticoid on HBV specific immune response, which will contribute to clinical therapy evaluation.

糖皮质激素（Glucocorticoid）联合抗病毒药物应用于慢性乙型肝炎及早期重症肝炎治疗多年，但在适应症及治疗效果方面存在较大争议。T细胞介导的肝脏免疫病理损伤以及伴随的非特异性免疫细胞在肝脏浸润是慢性乙型肝炎重症化的主要原因，而糖皮质激素选择性地作用于T细胞，显著降低T细胞的数量与活性，但具体机制不明。根据我们前期工作基础及结合文献分析我们提出：糖皮质激素可能通过抑制HBV抗原加工、呈递、及特异的CD8+T细胞活化和增殖，导致特异的CD8+T细胞耗竭与凋亡。我们拟采用HBV体外感染细胞与HBV特异的CD8+T细胞共培养系统，模拟HBV抗原提呈加工及T细胞活化过程，并结合临床慢性乙型肝炎及早期重症肝炎患者糖皮质激素治疗前后免疫学分析，阐明糖皮质激素对HBV特异的CD8+T细胞的免疫应答的影响及其机制，为糖皮质激素在临床上的合理应用提供理论依据。

糖皮质激素作为免疫调节剂，联合抗HBV病毒药物预防慢性乙肝重症化及治疗重症乙肝已经在临床应用多年，但其适应症及治疗效果存在较大争议。本课题研究了糖皮质激素在治疗HBV慢性感染病人中对T细胞的增殖、活化分化以及免疫功能的影响，探讨了其可能的细胞和分子机制。我们研究发现：早期使用糖皮质激素可以改善重症乙肝患者肝功能指标，体外培养刺激实验发现糖皮质激素可以降低CD8+ T细胞的转录因子脱中胚蛋白（Eomesodermin，Eomes）表达，抑制干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-ɑ）、穿孔素（Perforin）和颗粒酶B（Granzyme B，Gzm B）的分泌；下调表面活化分子HLA-DR表达，降低HLA-DR+ CD8+ T细胞和CD38+ HLA-DR+ CD8+ T细胞比例；上调其抑制性受体分子程序性死亡受体-1（Programmed cell death 1，PD-1）、T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3（T-cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule，Tim-3）的表达。 结果表明糖皮质激素通过下调转录因子Eomes/T-bet及上调抑制性受体分子PD-1/Tim3来抑制CD8+T细胞活化、分化及功能。糖皮质激素受体广泛高表达于CD4+T细胞亚类，为此我们拓展分析了糖皮质激素对I型调节性T细胞（Tr1）、调节性T细胞（Treg）、滤泡辅助性T细胞（Tfh）的影响，发现糖皮质激素通过提高Tr1细胞增殖分化及分泌IL-10、TGF-β等细胞因子，通过抑制Tfh细胞的增殖分化以及表面活化分子CD38+以及HLA-DR表达，抑制细胞因子IL-21、IL-10以及IFN-γ的分泌来调节CD8+T细胞的免疫功能，表明糖皮质激素不仅直接抑制CD8+ T细胞，而且通过调节CD4+T细胞亚群来调控CD8+T细胞的免疫功能。本研究从细胞和分子机制揭示了糖皮质激素对T细胞的活化、增殖、分化及免疫功能的影响，为临床应用糖皮质激素联合抗病毒药物治疗HBV提供理论参考；也为引入细胞治疗方案，调整病人的Tr1细胞、Tfh细胞和CD8+T细胞比例及免疫状态来治疗HBV慢性感染起指导作用。