低剂量毒死蜱-乙草胺复合污染对中华蟾蜍DNA损伤及基因差异表达

广泛存在的农药残留污染和不断积累的农药残毒严重影响两栖动物的健康、发育和繁殖，明确复合污染对两栖动物分子毒理效应与作用机理势在必行，也是为合理有效保护野生两栖动物提供技术支持。本课题拟在前期工作的基础上，以中华蟾蜍为研究对象，选用普遍使用的两种典型农药毒死蜱和乙草胺，采用单细胞凝胶电泳技术、高效液相色技术、双随机引物扩增技术（RAPD）和mRNA差异显示反转录PCR技术（DDRT-PCR），研究低剂量毒死蜱-乙草胺复合污染物对中华蟾蜍的分子毒理效应。研究将确立低剂量农药复合污染物对中华蟾蜍不同组织DNA损伤的剂量-效应关系；明确复合污染物对中华蟾蜍DNA损伤机理；分离鉴定相关的毒性基因，分析毒性基因表达的差异性。该研究为早期诊断农药复合污染物提供有效分子指标，对阐明低剂量农药复合污染物对两栖动物的分子生态毒理机制有重要意义，对研究两栖动物的野外生态毒理和评价农药生态风险奠定科学基础。

广泛存在的农药残留污染和不断积累的农药残毒严重影响两栖动物的健康、发育和繁殖，明确复合污染对两栖动物分子毒理效应与作用机理势在必行，也是为合理有效保护野生两栖动物提供技术支持。本课题在前期工作的基础上，以中华蟾蜍为研究对象，选用普遍使用的两种典型农药毒死蜱和乙草胺，采用单细胞凝胶电泳技术、高效液相色技术、双随机引物扩增技术（RAPD）、半定量PCR技术（RT-PCR）和实时荧光定量技术（RT-qPCR），研究低剂量毒死蜱-乙草胺复合污染物对中华蟾蜍的分子毒理效应。研究确立了低剂量农药复合污染物对中华蟾蜍血细胞和肝细胞DNA损伤的剂量-效应关系，复合污染与单剂相比，随着剂量的增加损伤程度逐渐降低；明确了复合污染物对中华蟾蜍DNA损伤机理，表明该农药可通过氧化胁迫造成DNA损伤，也可直接导致DNA链断裂和交联；分析发育毒性基因表达的差异性，发现调控肢体发育的相关基因HoxA3,11,13三个基因，在不同剂量的复合污染物作用下，与空白对照相比，差异显著。该研究为早期诊断农药复合污染物提供有效分子指标，对阐明低剂量农药复合污染物对两栖动物的分子生态毒理机制有重要意义，对研究两栖动物的野外生态毒理和评价农药生态风险奠定科学基础。以上成果以学术论文（已发表论文3篇，待发表3篇，已申请专利1个）公开发表。