A20通过负反馈调控NF-κB炎症通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用研究

The mechanisms of early brain injury(EBI) after subarachnoid hemorrhage(SAH) are complicated. Nuclear factor κB(NF-κB) ,as an important transcription factor, is an important target for EBI after SAH. Zinc finger protein A20 is an NF-κB feedback inhibitory in many inflammation related diseases. So far, no study described the role of A20 in NF-κB signal pathway in SAH. Our preliminary experimental results show that the expression of A20 was elevated, with a peak as high as cytokines and NF-kB after SAH .But the accurately role of A20 on EBI and NF-κB is unclear after SAH.To this end,we propose the hypothesis: A20 negatively regulates NF-κB and protectes EBI after SAH. To test this hypothesis, we apply SAH model in vivo and in vitro, and use methods of Western blot, immunofluorescence, inhibitors and RNA interference. From the molecular, cellular, tissue and body levers, we explore the role of A20 is an NF-κB feedback inhibitory and protectes EBI after SAH.In this stduy, A20 may be the “brake” of NF-κB mediated inflammation,which provide us a new strategy for controlling brain injury after SAH.

蛛网膜下腔出血（SAH）后的早期脑损伤机制复杂。炎症调控中枢核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是SAH后早期脑损伤后的重要靶点。A20是一个NF-κB的负反馈抑制因子。迄今尚无有A20在SAH后NF-κB介导的炎症中的作用研究。我们前期的研究发现：SAH后A20蛋白表达升高，且高峰期与细胞因子及NF-κB活性一致。但A20在SAH后早期脑损伤及NF-κB信号通路中的具体作用不明确。因此我们提出假说：SAH后，A20负反馈调控NF-κB并保护EBI。为了验证这一假说，我们应用体内、体外SAH模型，采用Western blot、免疫荧光、抑制剂和RNA干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨A20是NF-κB负反馈调节因子并且保护SAH后早期脑损伤。本研究，A20可能成为NF-κB介导的炎症反应终止的“刹车”，这将为SAH后脑损伤的防治提供新的思路。

蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后的早期脑损伤（early brain injury, EBI）是决定其预后的重要因素，蛛网膜下腔出血（SAH）后的早期脑损伤机制复杂。炎症调控中枢核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)是SAH后早期脑损伤后的重要靶点。A20是一个NF-κB的负反馈抑制因子。迄今尚无有A20在SAH后NF-κB介导的炎症中的作用研究。本研究中，我们应用体内、体外SAH模型，采用Western blot、免疫荧光、抑制剂和RNA干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨A20是NF-κB负反馈调节因子并且保护SAH后早期脑损伤。本研究结果显示SAH后A20表达升高，并且在1天时高峰，进一步免疫荧光显示A20定位于神经元，小胶质细胞和星型胶质细胞。在SAH体内模型中，沉默A20导致TRAF6/NF-κB及其下游炎症因子均明显升高，明显加重SAH后早期脑损伤（血脑屏障破坏，脑水肿和细胞凋亡，及神经功能评分）；反之，过表达A20则抑制TRAF6/NF-κB及其下游炎症因子的表达，明显缓解SAH后早期脑损伤。而使用TPCA-1（NF-κB特异性抑制剂）抑制NF-κB，明显加重SAH后炎症反应及抑制A20的表达。体外模型中，也部分验证上述结果。因此，SAH后，A20负反馈调控NF-κB并保护EBI，对炎症起到“刹车”作用。本研究也为A20对SAH后的神经保护作用提供了新靶点，为后续研究提供新的理论依据和思路。