基于肝星状细胞介导的微环境免疫编辑紊乱探讨鳖甲煎丸防治肝癌的分子机制

Hepatic stellate cells(HSC) mediated immune editing disorder of liver microenvironment，which is one of the key events to accelerate the process of hepatic fibrosis(HF) and hepatocellular carcinoma(HCC)，and blocking the pathological process has important clinical significance in reducing the incidence and mortality of HCC. Based on the Biejiajian pills，which could effectively intervene the activation of HSC and adjust the local immunoinflammatory environment of the liver，this study further suggested that Biejiajian Pill by interfering with the immunological activity of HSC and its mediated microcyclopedia of immune editing state blocking HF-HCC process，so the role of prevention and treatment of HCC could be achieved. In this study, HSC and HCC rat were used as the research object，HSC with different degrees of activation were observed by three-dimensional culture, immunohistochemistry, tissue microarray and protein microarray technology，which to explore the effect of Biejiajian Pill on HSC mediated microenvironment immuno-editing and to prevent the molecular mechanism of HCC. This project has important clinical application value to improve the pathogenesis of HCC，and it can help to further explain the scientific connotation of multi-channel and multi-level anti-hepatocarcinoma of Biejiajian pills, and provide sufficient theoretical basis for the clinical application of the drug.

肝星状细胞（HSC）介导的肝脏微环境免疫编辑紊乱是加速肝纤维化-肝癌病理进程的关键事件之一，而阻断其病理进程对降低肝癌发生率及死亡率具有重要的临床意义。基于鳖甲煎丸能有效干预HSC的活化并调节肝脏局部免疫炎性环境的工作基础，本研究进一步提出：鳖甲煎丸通过干预HSC的免疫学活性及其介导的微环境免疫编辑状态阻断肝纤维化-肝癌进程，从而达到防治肝癌的作用。本项目拟以HSC及大鼠肝癌模型为研究对象，采用细胞三维培养、免疫组化、组织芯片、蛋白芯片等技术方法，观察不同活化程度的HSC在表面抗原与细胞因子等的差异表达，并围绕HSC活化/去活化对肝脏免疫微环境的影响这一中心环节，探讨鳖甲煎丸通过干预HSC介导的微环境免疫编辑达到防治肝癌的分子作用机制。本项目对完善肝癌的发病机制研究具有重要的临床应用价值，并有助于进一步诠释鳖甲煎丸多途径、多层次抗肝癌的科学内涵，为该药的临床应用提供充分的理论依据。

肝星状细胞（HSC）介导的肝脏微环境免疫编辑紊乱是加速肝纤维化-肝癌病理进程的关键事件之一，而阻断其病理进程对降低肝癌发生率及死亡率具有重要的临床意义。本研究中围绕项目任务，分别开展了鳖甲煎丸（Biejiajian Pill, BJJ）含药血清对PDGF诱导的HSC激活的作用机制研究和鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌发生的抑制作用及机制探究，总体进展情况如下：（1）鳖甲煎丸含药血清对PDGF诱导的HSC激活的作用机制研究:通过PDGF诱导HSC激活并给予BJJ含药血清处理。MTT和EdU实验结果显示BJJ含药血清可显著抑制PDGF引起的HSC细胞增殖活性；ELISA实验结果显示BJJ含药血清可显著降低PDGF处理后HSC中I型胶原(Col-I) 、白介素-6( IL-6)、PDGF-AA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；并可显著抑制PDGF处理后TGF-β1和α-SMA表达；免疫印迹实验显示鳖甲煎丸含药血清可抑制TLR4、p-IKK表达并升高p-IκBα表达。结论是鳖甲煎丸含药血清可通过作用于TLR4-NFκB信号通路抑制HSC细胞增殖和激活。（2）鳖甲煎丸对DEN诱导大鼠肝癌发生的抑制作用及机制探究.通过研究鳖甲煎丸对DEN诱导大鼠肝癌的抑制作用及其对炎症小体相关通路的影响，探讨其肿瘤抑制作用与炎症小体信号通路的关系。结果显示鳖甲煎丸可显著抑制大鼠肝脏肿瘤生长，HE和Masson染色结果显示鳖甲煎丸可降低大鼠肝组织纤维化程度，减少癌变细胞和炎性细胞浸润。ELISA实验结果显示，鳖甲煎丸可显著降低DEN处理后大鼠血清中增加的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）含量，同时显著升高肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和 胱甘肽过氧化物酶(GPX )含量，并降低丙二醛（MDA）水平。对炎症小体通路相关分子的检测结果表明，鳖甲煎丸处理可显著降低肝脏NLRP3、ASC、Caspase-1、 pro-IL-1β、pro-IL-18 、IL-1β 和 IL-18表达水平，且呈现剂量依赖相关。结论是鳖甲煎丸对DEN诱导大鼠肝癌的有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖且这种抑制作用与抗氧化能力的增强及显著下调炎症小体相关通路相关。