宿主因子在乙肝病毒X蛋白增强HBV复制中的作用和机理研究

乙肝病毒X蛋白（HBx）对HBV转录和复制具有增强作用。我们的研究显示：HBx在基因转录水平对HBV启动子的反式激活功能与其增强HBV复制的作用密切相关。.本项目拟利用野生型和C启动子HNF4结合位点突变型HBV启动子报告基因体系，以及HBV体外肝源和非肝源 细胞复制模型，观察肝富集转录因子HNF4和（或）RXR/PPAR在HBx激活HBV C启动子、增强HBV RNA转录和HBV DNA复制中的确切作用和机理，以阐明HBx是否是通过HNF4和(或)RXR/PPAR激活HBV C启动子活性，从而增强HBV转录与复制。同时，通过建立对HBV复制有增强和无增强作用的HBx的稳定表达细胞株，利用差异蛋白组学技术筛选与HBx增强HBV复制相关的差异蛋白。.阐明HBx增强HBV转录复制的分子机制并寻找与其增强作用相关的宿主因子，将有助于阐明HBV的致病机理，并为寻找新的抗HBV治疗手段提供作用靶点。

本项目首次利用HBx表达缺失的HBV肝癌细胞复制模型研究发现，外源性增加HBx表达可增加HBV转录复制水平；阻断HNF4和RXR/PPAR与HBV C启动子主要结合位点的结合后，HBV转录复制水平的增加幅度有所降低，提示HBx增强HBV转录复制水平可能受HNF4和RXR/PPAR影响。利用HBx表达缺失的HBV转染非肝源细胞模型(NIH3T3)研究发现，HNF4单独存在条件下，外源性增加HBx表达可增强HBV转录复制水平；在RXR/PPAR单独存在条件下，外源性增加HBx表达无增强HBV转录复制水平的作用，该结果进一步提示HBx增强HBV转录复制受HNF4影响。此外，本项目构建了表达HBx（包括有或无增强HBV复制功能）的L02稳定细胞系以及Tet-on Advanced调控HBx表达的HepG2稳定细胞系，并利用差异蛋白组学技术，获得了一批可能与HBx增强HBV复制功能相关的差异蛋白，为阐明HBx致病机理和寻找新的抗HBV治疗靶点提供了新的思路。