活络效灵丹诱导MCPIP1表达促进小胶质细胞M2型转换抗缺血性脑卒中血脑屏障损害及机制研究

Regulation of microglia from M1 to M2 is an important target for stroke therapy. Chinese medicine suggests that the blood stasis is the.critical point of the pathophysiology of ischemic stroke, which induces and aggravates the inflammatory processes of ischemic stroke. The blood circulation recovery can prevent cerebral ischemia and inflammatory injury. Our study shows that HLXLD can induce the expression of MCPIP1 in brain tissue, inhibit the NF-kB signaling pathway and reduce the permeability of blood-brain barrier after ischemia. MCPIP1 is a novel important inhibitor of inflammatory. It can promote the transformation of MΦ to M2 by regulating the related transcription factors such as PPARγ, C / EBPβ signaling pathway and autophagy. The aim of this project is to use the brain conditional MCPIP1 knockout animal and middle cerebral artery occlusion model to explore whether HLXLD can induce the M1 type transformation by promoting the expression of MCPIP1 and promote the transformation of M2 by multi-channel signaling pathway to improve the blood brain barrier injury after stroke. From the animal level and cellular and molecular level to clarify the role of HLXLD compound’s multi-target effects as a scientific basis for the HLXLD clinical application.

调节小胶质细胞由M1型向M2型转化是脑卒中治疗的重要靶点。中医理论认为，“瘀”可致炎症是缺血性脑卒中的重要病理机制，活血化瘀法能够阻止脑缺血炎症损伤，我们研究表明活络效灵丹（HLXLD）通过抑制NF-kB信号通路抗脑缺血炎症损害，可以诱导脑组织MCPIP1表达增加，使缺血后血脑屏障通透性降低。MCPIP1是近年发现的机体重要的抑制炎症反应蛋白分子，它能通过调节相关转录因子如PPARγ，C/EBPβ信号通路及自噬（Autophagy），促使MΦ向M2型转化。本项目拟利用脑部条件性MCPIP1基因敲除动物，大脑中动脉阻塞模型，观察HLXLD通过诱导MCPIP1表达，经多途径信号通路抑制小胶质细胞M1型转化，促进M2型转化，从而防治缺血后血脑屏障损害，从整体动物水平和细胞分子水平阐明HLXLD复方作用多靶点的科学问题，为活络效灵丹临床治疗提供坚实的实验依据。

缺血后脑组织小胶质细胞（Microglia）活化在脑组织炎症反应中起重要作用，调节脑组织非活化小胶质细胞MΦ向M2型转化是脑缺血治疗的重要靶点，炎症抑制相关转录因子如PPARγ促使MΦ向M2型转化。MCPIP1（monocyte chemotactic protein–induced protein 1，MCPIP1）蛋白是体内重要的诱导性的炎症反应抑制因子，它能激活PPARγ表达，促使MΦ向M2型转化。脑缺血引起的炎症反应可导致基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）快速表达，其中MMP-3及MMP-9在脑缺血损伤病理机制中起重要作用，增多的MMPs可以使血脑屏障通透性增加，导致脑水肿，加重脑卒中后脑组织病理及神经功能损害。.我们在MCPIP1基因敲除小鼠中，用脑缺血再灌注损伤模型，发现MCPIP1基因敲除会导致脑缺血小鼠MMP-9/3的表达升高，加重缺血再灌注后脑组织炎症反应，引起脑损伤及血脑屏障损害。因此，本项目利用大脑中动脉阻塞模型，观察了活络效灵丹对脑缺血再灌注损伤的治疗效果，跟对照组相比，活络效灵丹可以使脑缺血鼠MCPIP1、PPARγ蛋白表达显著升高，CD206、Arg1也显著升高，证明活络效灵丹可以通过诱导MCPIP1升高，激活PPARγ表达，促使MΦ向M2型转化。实验结果还显示，活络效灵丹可以使脑缺血鼠脑水肿程度降低，血脑屏障通透性减弱，使炎症因子TNF-α、IL-6、iNOS、IL-1β含量显著下降，MMP-3、MMP-9的表达也均有显著下降。.本项目的实验研究结果证明了活络效灵丹对缺血性脑卒中血脑屏障损伤的治疗作用，这种治疗作用是通过诱导MCPIP1的表达，促进小胶质细胞M2表型的转化，抑制神经炎症，从而减轻缺血后脑损伤及血脑屏障损害，为活络效灵丹治疗脑缺血的进一步临床应用奠定了实验基础。