新型人γTNFβ融合基因重组及表达产物抗癌机理的研究

将已克隆的hIFNγ和hTNFβ基因（缺失体）片段加以修饰，分别与pBV220（含λPRPL启动子、温敏诱导）、pET28和PRSETC（含T7lac启动子和His6-tag、IPTG诱导）重组，构建成hIFNγ、hγTNFβ和hTNFβ高效表达质粒，并转化于E.coli DH5α和BL21（DE3），各工程菌的hγTNFβ表达量为18-45%，hIFNγ为42%左右，TNFβ为26%左右。由于表达产物在工程菌以形成包含体（IB）为主，经变性、复性、分离纯化或经酶切His6-tag后产物其最高抗病毒比活性为5.0-5.8×10（7）u/mgp，细胞毒比活性为4.2-4.9×10（7）u/mgp，但产物极易失活。抗癌机理的初步研究表明，在相同剂量条件下，γTNFβ的杀伤效应明显高于单因子TNFβ，应用8种信号转导抑制剂研究提示PLA2、Ca（2+）和NF-KB参与TNFβ和γTNFβ杀伤的信号转导。γTNFβ是否通过Caspase信号途径透导靶细胞凋亡尚待研究。