枸杞多糖缓解雄性仓鼠生殖损伤的途径及机理研究

环境雌激素严重影响人类及动物的生殖功能，但缓解其危害的研究资料却非常有限。申请者前期工作证实，枸杞多糖（LBP）显著缓解己烯雌酚（DES）诱导的雄性仓鼠生殖损伤，增加机体抗氧化能力。本项目利用DES生殖损伤模型，继续探索LBP保护雄性生殖的途径及其机理。采用免疫组织化学、Western Blot、TUNEL、RT-PCR等方法，研究LBP对生精细胞凋亡及其相关基因表达的影响；明确LBP对下丘脑-垂体-睾丸轴及其对激素受体表达的作用；评价LBP对体外培养生精细胞的保护效果。从器官水平、组织水平、细胞水平、分子水平等不同层面，体内与体外实验相结合的方法深入探索LBP缓解DES生殖毒性的机理。本研究将传统中药与其现代药理相结合，针对目前无处不在的环境雌激素，探索缓解其危害的措施，为人类及动物的生殖健康提供保障，有助于推动中药产品的国际化。

环境内分泌干扰物（EEDs）对人类及动物生殖系统的不良影响备受关注。己烯雌酚（DES）是人工合成的类雌激素化合物，经常作为研究EEDs生殖损伤的药物模型。双酚A（BPA）对动物生殖功能的影响也逐渐受到关注。枸杞是我国传统的中药材，具有滋补肝肾，益精明目的功效。枸杞多糖（LBP）对机体的免疫功能和抗氧化能力有显著的增强作用，还具有降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、保护生殖系统等功能。研究证实，槲皮素也显著提高机体抗氧化能力及提高机体免疫力。本实验通过DES、BPA等药物模型，主要研究LBP、槲皮素等中药成分对仓鼠及小鼠生殖功能的保护作用。试验主要分为三部分。第一部分研究枸杞多糖等中药成分对己烯雌酚致成年雄性仓鼠睾丸损伤的缓解作用及机理；将成年雄性仓鼠用DES处理同时，灌服不同剂量LBP或维生素，用药7天。结果DES处理仓鼠的睾丸、附睾及精囊腺的重量分别显著下降，精子密度显著性降低，补充10、50 mg/kg LBP和维生素C和E均显著提高生殖器官重量及精子数量，同时SOD及GSH-Px含量上升，MDA含量下降；并剂量依赖性调节睾丸组织中T、LH及FSH的水平；经过免疫组织化学、RT-PCR、Western-blot等方法检测证实，随LBP剂量的升高，Bax、Fas、FasL及caspase-3等凋亡相关蛋白的表达随之下降，Bcl-2的表达显著上升。第二部分利用体外仓鼠睾丸生精细胞培养技术，证实槲皮素能提高生精细胞活力、提高抗氧化水平及降低caspase-3凋亡蛋白的表达。第三部分研究枸杞多糖、槲皮素等成分对双酚A致小鼠生精损害的缓解作用。本试验通过BPA构建小鼠睾丸损伤模型，证实LBP也能够缓解BPA诱导的小鼠生精损伤，提高小鼠体内T和LH水平，改善机体的抗氧化状态，降低Fas、FasL、caspase-3等凋亡蛋白的表达。流式结果显示，添加LBP后小鼠单倍体细胞所占百分数较BPA组有所增加，二倍体细胞数没有太大变化，而四倍体细胞(包括细线期、粗线期、双线期的初级精母细胞和G2期的精原细胞、支持细胞和间质细胞等)所占百分比显著增加。槲皮素等中药成分也能够提高BPA小鼠体内抗氧化水平、降低BPA的生精损伤。结果证实，枸杞多糖对不同内分泌干扰物（DES、BPA）、对不同试验动物（仓鼠、小鼠）均能起到良好的保护雄性生殖的作用，可以用来缓解内分泌干扰物的生殖损伤。