视黄酸受体-γ(RARγ)在胆管癌发生发展中的作用及其胞浆转移机制

视黄酸受体-γ（RARγ）在多种肿瘤中发挥抑癌基因功能，然而最近研究发现，RARγ在某些肿瘤中异常转位于细胞质中，以癌基因形式参与肿瘤发生发展。本项目前期研究发现RARγ在胆管癌细胞发生胞浆转移，其胞浆表达下调会抑制胆管癌细胞生长，因此，本项目推测RARγ通过改变亚细胞定位参与胆管癌发生发展。本项目拟先采用免疫组织化学技术检测RARγ在胆管癌组织中的表达情况并探讨其临床意义；然后运用基因沉默技术和病毒载体过表达技术研究RARγ表达改变对胆管癌细胞生长与成瘤、迁移与侵袭及耐药性的影响。在此基础上，研究p38 MAPK对RARγ蛋白N末端A/B区域丝氨酸残基的磷酸化作用及其磷酸化位点，并研究RARγ磷酸化对其胞浆转移的影响，以论证p38 MAPK通过介导RARγ磷酸化而调控其胞浆转移的假说，最终阐明RARγ在胆管癌发生发展中的作用及其胞浆转移机理，为寻找胆管癌安全有效的治疗靶点提供科学依据。

胆管癌是一种起源于肝内或肝外胆管上皮细胞的恶性肿瘤，占所有人类胃肠道肿瘤的3%，其发病率在我国每年以5%的递增速度上升。胆管癌起病隐匿，早期诊断困难，术后复发率高，易产生耐药性，现有的放化疗药物治疗效果差，5年存活率低于5%，因此，研究胆管癌发病及其耐药产生机理对于临床胆管癌基因靶向治疗具有重要的意义。本项目主要研究RARγ参与胆管癌发生发展的作用及其胞浆转移机制。. 项目研究发现，RARγ在胆管癌组织异常高表达，且与组织低分化、淋巴结转移、血清高水平CA199 及患者预后差密切相关。RARγ 通过调控Akt/NF-кB 和Wnt/β-catenin 两条信号轴，介导PCNA、P21、MMP-9、CyclinD 和P-gp 等基因表达改变，促进胆管癌细胞生长与成瘤、迁移与侵袭， 同时还与胆管癌耐药性产生有关。RARγ在胆管癌组织细胞中发挥非基因组转录调控作用与其异常表达在细胞胞浆中有关。研究发现，RARγ蛋白在胆管癌细胞中的胞浆转移可能与RARγN末端A/B区域的77位和79位丝氨酸磷酸化以及p38 MAPK信号通路的调控有关。. 本项目在胆管癌耐药性方面进行深入的研究。进一步明确了Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导胆管癌细胞P-gp表达升高，从而介导胆管癌耐药性产生；非甾体类抗炎药七叶皂苷钠可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而逆转胆管癌细胞的耐药性。胆管癌细胞多药耐药性与其抗凋亡性密切相关。研究发现，细胞周期蛋白激酶Cks2在胆管癌中异常高表达，且与胆管癌预后差明显相关。进一步研究发现，Cks2可通过诱导胆管癌细胞的抗凋亡性介导胆管癌细胞的抗药性。另外，呼吸链蛋白分子伴侣Prohibitin蛋白在胆管癌细胞凋亡过程中，从细胞胞浆转移到胞核，并且与促凋亡蛋白P53和Rb蛋白相互作用，促进凋亡诱导剂介导胆管癌细胞的凋亡。这些研究发现，为临床逆转胆管癌多药耐药性提供了科学的参考依据。. 本项目阐明了RARγ 在胆管癌发生发展中的作用及其分子机制，以及Wnt/β-catenin信号通路和细胞凋亡在胆管癌耐药性产生中的作用，进一步揭示了胆管癌发病与耐药产生机理，为临床胆管癌靶向基因治疗提供了科学实验依据。