石榴皮单宁对单核细胞增生李斯特菌的抑制机理及对其致病性的影响

石榴皮提取物对一些重要的食源性致病菌有一定的抑制作用，在食品防腐中有良好的应用前景。目前对石榴皮提取物的抗菌研究多集中在探讨其抗菌谱，但对其中的主要抑菌成分单宁的抑菌机理以及单宁对细菌致病性的影响缺乏研究，而这些研究对石榴皮单宁(简称PRT)在食品中的应用有重要的推动作用。本研究在前期实验发现石榴皮提取物的抑菌效应的基础上，分离纯化出主要抗菌成分单宁。采用单核细胞增生李斯特菌(简称LM)为受试菌，从细菌超微形态、细胞膜完整性、菌体总蛋白表达以及菌体细胞周期等方面对PRT的抑菌机理进行探讨。此外，通过考察亚致死浓度下PRT对LM侵入上皮细胞能力的影响，以及测定PRT对LM的一些重要毒力因子表达的影响，从这两方面探讨PRT对LM的致病性的影响。本研究旨在初步揭示PRT对LM的作用机理，并研究亚致死浓度下PRT对LM致病性的影响，从而为开发基于PRT的天然食品防腐剂提供理论基础。

大量的研究表明石榴皮能抑制一些常见的食源性致病菌，同时其抗菌的活性可能和其中的单宁类物质有关。本课题旨在研究富含单宁的石榴皮提取物（TFPR）抑制单核增生李斯特菌（LM）的活性，并探究了TFPR对LM的抑制机理。同时对TFPR影响LM毒力因子的表达和LM与肠道上皮细胞的相互作用进行探讨。主要取得了以下结果：（1）石榴皮提取物的主要成分为安石榴苷，纯化后由安石榴苷(64.2%, g/g)和鞣花酸(3.1%, g/g)组成。石榴皮粗提物对不同株单核细胞增生李斯特氏菌最小抑菌浓度分别为1.25-5mg/mL。（2）经TFPR作用后，LM胞内物质（ATP, K+, DNA，LDH等）释放到胞外，细胞膜出现超级化现象，细胞内的pH显著降低，说明TFPR改变了细胞膜的完整性；由扫描电镜和透射电镜的结果知，TFPR对LM菌体有损伤作用，使菌体细胞表面破损，内容物溶出，导致菌体细胞死亡。（3）对LM生长曲线基本无影响的TFPR亚致死浓度分别为1/4 MIC、1/8 MIC和1/16 MIC。在亚致死浓度下，TFPR使LM的毒素基因prfA，inlA和hly的表达量显著降低，表明亚致死浓度下的TFPR影响LM的致病性。（4）TFPR在浓度高于2.5对上皮细胞有一定的毒性。在不影响Caco-2细胞增殖的浓度作用下，TFPR能够显著抑制LM侵入和粘附细胞，在一定范围内呈剂量依赖性。这些发现表明富含单宁的石榴皮提取物可以被开发成为新型的防腐剂用来控制食品中LM的污染从而减少食源性LM的感染。