Nrf2调控BRCA1的转录、功能及其启动子上组蛋白密码的研究

BRCA1基因的沉默或变异是导致乳腺癌发生的主要原因之一。本人已经发现Nrf2能够结合于BRCA1基因的启动子上并激活BRCA1的转录，本课题的目的就是要揭示Nrf2对BRCA1基因转录的调控作用和对BRCA1功能的影响，找出Nrf2在BRCA1基因启动子上的精确作用位点以及Nrf2对BRCA1基因启动子上的组蛋白密码的影响，并找出能够与Nrf2形成转录复合物的其它转录因子，以及它们对BRCA1基因转录的调控作用。.本课题在基因的启动子水平和组蛋白水平研究Nrf2调控BRCA1基因转录的机理，有助于分析转录因子与DNA之间的相互作用以及组蛋白修饰状态对基因转录的影响，具有重要的基础理论研究价值，属于生命科学研究中的前沿领域；本课题还有助于发现乳腺癌变或乳腺癌康复过程中新的分子靶点和新的分子机理，对于指导临床治疗乳腺癌具有实际的应用价值。

BRCA1基因的沉默或变异是导致乳腺癌发生的主要原因之一。有些转录因子可以结合到BRCA1基因的启动子上调节其转录。.本课题中我们采用报告基因检测技术发现Nrf2能够显著激活BRCA1启动子的活性；采用点突变和报告基因检测技术发现BRCA1的启动子上ARE元件反向序列突变后，Nrf2激活BRCA1启动子的作用显著下降，证明Nrf2是通过结合于BRCA1的启动子上ARE元件反向序列来激活BRCA1启动子的活性。采用EMSA技术发现Nrf2确实能够结合于BRCA1的启动子上ARE元件反向序列。.通过检测，我们发现BRCA1在HCC38细胞中表达量极低，在MCF-7细胞中表达量较高；在HCC38细胞中，BRCA1与BARD没有形成二聚体，BRCA1启动子上的组蛋白乙酰化程度极低，Nrf2与CBP、p300形成的转录复合物结合量少；而在MCF-7细胞中BRCA1与BARD可以形成二聚体；BRCA1启动子上的组蛋白乙酰化程度极高，Nrf2与CBP、p300形成的转录复合物结合量显著增高。.在HCC38细胞中高表达Nrf2后，可以显著升高BRCA1的表达，恢复BRCA1与BARD形成二聚体的能力，提高BRCA1启动子上的组蛋白乙酰化程度，BRCA1启动子上的Nrf2与CBP、p300形成的转录复合物结合量显著增高。 .在MCF-7细胞中采用siRNA抑制Nrf2的表达后，可以显著降低BRCA1的表达，BRCA1与BARD不能形成二聚体，显著降低BRCA1启动子上的组蛋白乙酰化程度，BRCA1启动子上的Nrf2与CBP、p300形成的转录复合物结合量显著下降。.在90例乳腺肿瘤中，采用免疫组化技术，发现Nrf2和BRCA1的表达呈显著正相关。.本研究发现，Nrf2与CBP、p300形成的转录复合物能够结合于BRCA1基因的启动子上并激活BRCA1的转录；Nrf2可以成为乳腺癌变或乳腺癌康复过程中新的分子靶点，对于指导临床治疗乳腺癌具有实际的应用价值。