新型呼肠病毒的细胞受体及其致病机理的研究

近年来，以呼吸道感染为主要传播途径的新发传染病流行频繁发生，病原主要是新型病毒或变异病毒，严重危害着我国公共卫生安全。因此，开展新病原学及其与宿主细胞相互作用研究非常必要。我们从北京SARS患者咽拭子中分离到5株呼肠病毒，分子生物学及血清学实验证明其为同一种新型呼肠病毒。该病毒可在动物试验中引发呼吸道感染症状疾病，但该病毒是否与SARS的发病和进程相关尚无明确证据。.呼肠病毒S1基因编码的σ1蛋白是病毒主要的型特异中和抗原，决定病毒的感染力和致病性，诱导机体产生中和性保护抗体。本项目拟在前期研究工作的基础上，构建新型呼肠病毒S1基因真核表达重组质粒和类病毒颗粒，筛选σ1蛋白的宿主细胞结合受体，研究新型呼肠病毒的感染机理及其与宿主相互作用的关系，并探讨新型呼肠病毒与SARS的可能相关性，从实验室研究角度阐明新型呼肠病毒在呼吸道疾病流行中所起的潜在作用。

近年来，以呼吸道感染为主要传播途径的新发传染病流行频繁发生，病原主要是新型病毒或变异病毒，严重危害着我国公共卫生安全。我们从北京SARS患者咽拭子中分离到5株呼肠病毒，该病毒可在动物试验中引发呼吸道感染症状疾病，分子生物学及血清学实验证明其为同一种新型呼肠病毒。呼肠病毒S1基因编码的σ1蛋白是病毒主要的型特异中和抗原，决定病毒的感染力和致病性，诱导机体产生中和性保护抗体。本项目构建新型呼肠病毒S1基因真核表达重组质粒，对其进行了原核及真核表达研究，利用免疫共沉淀筛选出σ1蛋白的宿主细胞结合受体；同时构建了包含S/M不同基因的重组真核表达质粒，对其在小鼠体内的免疫原性进行了研究；利用微量中和滴定和酶联免疫吸附的方法检测了不同人群中新型呼肠病毒抗体的流行情况。结果表明，新型呼肠病毒R4株的S1基因N端阅读框编码区（62－406 bp）在S1基因转染进入细胞时起到关键作用；利用N-TAP 串联亲和系统筛选细胞内与S1蛋白结合的宿主蛋白为网格重链蛋白I；S1基因可以同时诱发较强的细胞免疫和体液免疫反应，是较为理想的疫苗候选对象；在手足口、腹泻、麻疹、肝炎等不同病种人群中均能检测到R4抗体阳性。项目的研究结果有利于研究新型呼肠病毒的感染机理及其与宿主相互作用的关系，从实验室研究角度阐明新型呼肠病毒在呼吸道疾病流行中所起的潜在作用。