宫内高雌激素环境致长链非编码RNA Meg3印记改变及子代血管内皮功能紊乱的相关机制研究

A large number of epidemiological studies had indicated that IVF technologies increased risk of vascular disorders, cardiovascular remodeling in offspring by now, which need to be studied further. As we all know, IVF technologies base on controlled ovarian hyperstimulation which make pregnant women in a high serum estradiol environment. Our team previoursly found that high maternal estradiol environment induced high blood pressure in offspring; further more, we detect the abnormal expression of the long-noncoding RNA Meg3 in umblical vein endothelial cell; then we examine the methylation states of differential methylation region (DMR) of umblical vein endothelial cell; detect the expression level of vasoactive substance, such as NO, PGI2, AT II, ET1 in umbilical cord; detect the expression level of p53, VEGF, MAPK, ERK, PI3K, eNOS in umblical vein endothelial cell to explore whether the mechanism of Meg3 expression alteration is associated with vascular disorder. Using in vitro cell culture, applying technology of transfection and siRNA against Meg3 expression, correcting vascular dysfunction caused by abnormal expression Meg3; We are in the hope of revealing the probable mechanism of vascular dysfunction by high maternal serum estriadiol environment, providing theory basis for controlling the adverse effect influence by high maternal serum estriadiol environment at the source.

目前大量流行病学调查指出IVF子代出现血管功能紊乱，心血管结构重塑等现象，但缺乏具体的机制研究。而IVF本身借助超促排卵技术，致IVF孕妇妊娠期处于高雌激素环境。本实验基于前期随访研究发现宫内高雌激素环境出生子代出现血压升高，并进一步发现其脐血管内皮细胞上长链非编码RNA Meg3表达异常，并进而分析宫内高雌激素是否影响其相应差异甲基化区（DMR）甲基化状况；检测脐血中血管活性物质NO、PGI2、AT II、ET1的水平评估脐血管功能；检测高雌激素环境下脐血管内皮细胞上p53、VEGF、MAPK、ERK、PI3K、eNOS的表达情况，研究Meg3对血管内皮细胞的可能调控机制；进行体外细胞培养，应用转染及siRNA技术对抗Meg3的表达，纠正Meg3表达异常引起的血管功能紊乱；揭示宫内不良环境所致子代血管功能紊乱的可能发生机制，为宫内高雌激素所致的不良效应实现源头控制提供理论依据。

背景：一些研究表明，通过体外受精（IVF）出生的儿童患心血管功能障碍的风险增加;然而，这种关系背后的机制尚未阐明。在我们的研究中，我们的目标是探索解决这些临床观察的潜在分子机制。.结果：通过回顾我院的历史记录，我们发现脐带收缩末期峰值与舒张末期峰值（S / D）的比值在孕38周IVF和自然妊娠子代间无显着差异。Realtime-PCR分析显示，IVF后代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中长链非编码RNA（lncRNA）Meg3的表达水平高于自然妊娠出生后代。此外，我们发现内源性一氧化氮合酶（eNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平较低，并且与自然妊娠出生的后代相比，来自IVF后代的HUVEC中内皮素-1（ET1）的表达升高。通过培养不同雌二醇水平的原代HUVEC，我们进一步证实了我们的体内实验的结果，证明高雌二醇宫内环境导致MEG3和内皮衍生因子的异常表达。同时，沉默Meg3表达降低ET1表达，并增加亚硝酸盐，硝酸盐，VEGF分泌，这可以纠正我们在体内观察到的效果。通过焦磷酸化技术，我们发现在IVF后代的HUVEC中MEG3的升高表达是Meg3启动子低甲基化的结果。.结论：我们的结果显示，IVF后代的HUVECs具有升高的MEG3表达以及eNOS，VEGF分泌减少和ET1分泌增加，这些共同提供了解决IVF后代高血压高风险的潜在机制。