耐辐射奇球菌特有DNA损伤修复基因ddrB功能分析

ddrB是一个电离辐射后被大量诱导转录的耐辐射奇球菌特有的修复基因，在耐辐射奇球菌极端辐射抗性中发挥了非常重要的作用，但其具体的功能和作用机制还不清楚，为此本申请将通过体外生化研究确定DdrB蛋白的主要生物化学功能，通过体内及体外研究确定ddrB和耐辐射奇球菌中已知的DNA损伤修复基因（ssb、recA、recQ、recO、recR、recF等）的关系。同时鉴定出体内与DdrB相互作用的蛋白，通过体内及体外研究确定互作蛋白对ddrB生物学功能的影响。本课题的目的是通过上述研究来阐明ddrB基因在耐辐射奇球菌DNA损伤修复中作用。通过本研究详细说明ddrB基因作用的分子机制以及其在耐辐射奇球菌DNA损伤修复中的地位，这将为阐明耐辐射奇球菌高效修复系统的分子机制，以及潜在的新型生物抗逆种质资源的开发、污染环境的生物修复等方面的应用提供有价值的理论依据。

过去的3年，我们按照计划书研究内容，开展了相关工作，取得了一些研究成果，对耐辐射球菌特有修复基因ddrB的功能也有了更加全面的认识。DdrB蛋白和SSB蛋白类似，是单链DNA特异性结合蛋白。但我们发现DdrB和SSB两者的功能又有差别，DdrB除了单链DNA结合活性还有促进互补单链DNA退火活性。同时DdrB和SSB在体外可以互作。然后我们又重点分析了DdrB和SSB与单链DNA的关系，发现SSB和短的单链DNA有优势；而对于长的单链DNA，两者存在竞争关系，可以相互取代。另外，DdrB可以抑制RecJ的核酸酶活性，而SSB则相反。这些结果预示了他们体内功能的差异。.通过体内串联纯化技术-TAP和体外pull-down技术，我们也筛选到了一些和DdrB蛋白可能互作的蛋白，其中大部分蛋白都是功能未知蛋白。特别有意思的是DdrB和复制蛋白DnaB存在互作。这些蛋白和DdrB的互作及体内功能还有待于以后实验的验证和研究。.这些结果为以后进一步解析耐辐射球菌DdrB功能提供了参考