miR-28-5p在ITP发病中的作用

MicroRNAs are small-noncoding RNA molecules that post-transcriptionally regulate gene expression by degradation or translational repression. Recently, emerging evidence has demonstrated that miRNAs play vital roles in the megakaryocytic differentiation and invasion of autoimmunity. Through detecting the expression profiles of microRNAs in primary immune thrombocytopenia (ITP) patients and normal controls, we found that miR-28-5p is significantly lower in ITP patients than that of controls.Further bioinformatics analysis showed that the target genes of this microRNA are structure specific recognition protein 1(SSRP-1) and Ras-proximate-1b (Rap-1b).For SSRP-1 was involved in DNA replication and transcription,and Rap-1b played an important role in cell adhesion and megakaryocytic differentiation, we speculate that miR-28-5p is involved in ITP by regulating SSRP-1 and Rap-1b. Thus in this project,to elucidate the role of miR-28-5p in pathology of ITP,we will focus on the effects of SSRP-1 and rap-1b on physiology of ITP and the association between miR-28-5p and target genes.In addition, we will validate the results of experiments in vitro in ITP mouse models,which will provide a theoretical basis of new treatment strategy for the ITP patient.

microRNA能够在转录后水平调节基因表达，在自身免疫性疾病中起到重要作用。通过miRNA表达谱分析，我们发现 miR-28-5p在原发免疫性血小板减少症（ITP）中显著低表达，且预测到其靶基因为结构特异性识别蛋白-1（SSRP-1）和Ras近侧蛋白-1b（Rap-1b）。鉴于SSRP-1在DNA复制和转录中的作用及Rap-1b对细胞粘附和巨核细胞成熟的调节作用，我们推测miR-28-5p通过调节SSRP-1及Rap-1b参与ITP的发生。本项目中我们拟通过研究SSRP-1在ITP病人淋巴细胞增殖、周期和凋亡中的作用、Rap-1b与细胞粘附及巨核细胞发育异常的关系以及miR-28-5p与靶基因间的相互调节作用，全面阐述miR-28-5p在ITP中的作用。并将体外研究结果在动物模型内进行验证，为以miR-28-5p为靶点的治疗提供理论依据。

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种由于分泌自身抗血小板抗体造成血小板破坏过多及生成不足的自身免疫性疾病。研究发现多种表观遗传学的异常参与ITP的发生，但目前为止miR-28-5p在ITP发病中的作用尚不清楚。本项目探讨miR-28-5p在ITP发病中的作用。研究发现：（1）慢性成人ITP患者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-28-5p的表达较正常对照明显下降，说明miR-28-5p的异常表达参与ITP的发生。（2）靶基因预测及双荧光报告基因分析结果显示SSRP-1为miR-28-5p的靶基因，而Rap-1b不是miR-28-5p的靶基因。（3）ITP患者T、B及单核细胞内SSRP-1的表达与正常对照相比无差异，且与这些细胞的增殖及凋亡异常无关。（4）Rap-1b的表达随着巨核细胞的成熟而减少，同时ITP患者成熟巨核细胞中Rap-1b的表达明显高于正常对照。另外，在巨核细胞与基质细胞混合培养体系中加入Rap-1b抑制剂处理能明显下调这两种细胞间粘附作用。说明Rap-1b通过诱导巨核细胞分化及参与巨核细胞与基质细胞的相互作用调节巨核分化。（5）ITP患者不同类型淋巴细胞内Rap-1b及相关粘附分子CD11a、CD18及CD54的表达与正常对照相比无明显异常。（6）同时研究了长片段非编码RNA TMEVPG1在ITP中的作用，结果显示ITP患者PBMCs中TMEVPG1的表达较正常对照相比明显下降。进一步机制分析显示短时刺激能明显促进TMEVPG1的表达，进而上调IFNr转录。但随着刺激时间增长，上升的IFNr能反过来通过负反馈机制下调TMEVPG1的表达，因而ITP患者血浆IFNr的高表达可能通过负反馈机制造成PBMCs中TMEVPG1的表达下调。综上所述，本研究发现非编码RNA miR-28-5p及TMEVPG1在ITP患者PBMCs中表达均存在异常，且Rap-1b通过调节巨核发育参与ITP发生。本研究的进行进一步拓宽了我们对ITP发病机制的认识，同时也为将来以非编码RNA为靶点的靶向治疗提供理论依据。该项目共发表文章24篇，其中SCI文章17篇。培养博士毕业生6名，硕士毕业生1名。