脱氢表雄酮对损伤血管内皮保护作用机制研究

本课题组前期研究已在体外培养的原代内皮细胞中证实CD40和CD40L诱导内皮细胞的损伤，参与动脉粥样硬化（AS）的发生和发展，而脱氢表雄酮（DHEA）能抑制CD40和CD40L的表达，同时能下调CD40L诱导的E-selectin、ICAM-1和ET-1的表达以及抑制TNF-a诱导的内皮细胞凋亡，因此阻断CD40L的作用有助于延缓动脉粥样硬化的发生。本项目拟应用分子生物学技术进一步明确DHEA 对损伤血管内皮保护作用的靶位及抗炎作用机制，探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路以及CD40、CD40L在AS形成中的作用，通过DHEA的干预，观察DHEA对MAPK信号中的蛋白激酶活性及磷酸化的影响，并应用球囊损伤内膜AS兔模型在体内探讨DHEA对内皮损伤的保护作用，明确MAPK信号通路在AS形成中的作用，为进一步研究AS的发病机制及今后寻求新的AS治疗方案提供理论依据。

脱氢表雄酮（DHEA）作为性激素的前体，是人体中含量最多的类固醇激素，大多数研究表明其对男性具有抗动脉粥样硬化（AS）的作用。内皮的损伤是动脉粥样硬化斑块形成的起始环节，内皮细胞的异常增殖和凋亡以及多种炎症因子参与了内皮的损伤。炎性细胞因子CD40和CD40L在动脉粥样硬化发生发展过程中起到了激活炎症细胞、启动炎症反应的作用，是介导内皮细胞炎症反应的重要介质。本研究探讨脱氢表雄酮对人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响，以及内皮细胞炎症因子表达的调控作用，为脱氢表雄酮对心血管的保护作用提供部分理论依据。. 研究结果表明10-8~10-6 mol/L 的DHEA抑制内皮细胞的增殖。经TNF-a诱导的内皮细胞凋亡率高达18.21％，而DHEA对内皮细胞凋亡有明显抑制作用，且呈剂量依赖性。CD40L作用内皮细胞24h后，eNOS mRNA表达降低，而加入DHEA干预后，诱导eNOS mRNA的表达显著增加，并呈剂量依赖性，并且DHEA促进内皮细胞NO含量明显增加。通过细胞划痕试验和Transwell细胞迁移实验，结果表明CD40L抑制内皮细胞的迁移，而DHEA干预能逆转CD40L的作用，促进内皮细胞的愈合。同时DHEA能抑制内皮细胞ERK1/2蛋白磷酸化表达。对于CD40L诱导的内皮细胞ET-1、E-selectin和ICAM-1等炎性因子的mRNA和蛋白表达，DHEA能抑制CD40L诱导的炎症因子的合成和释放，并且呈剂量依赖性。DHEA对血管内皮具有一定的保护作用，为今后寻求新的AS治疗方案提供了理论依据。