当归四逆汤干预MAPK介导的VSMC增殖防治动脉硬化闭塞症的机制研究

Pathogenesis of ASO relat with proliferation of vascular smooth muscle cells. Vasoactive substances mediated by ERK1 In MAPK family is the key to proliferation of VSMC.the research shows that Pathogenesis of ASO relat with hypothalamus and limbic system.but specific brain location ande mechanism are unclear. According traditional Chinese medicine, the heart governs the blood circulation and lesion site of ASO is vascular,but its pathogenesis lies in heart and it has unique effect in treating ASO form heart. Therefore,we guess VSMC proliferation mediated by MAPK in ASO Probaboly is molecular basis of "the heart governs the blood circulation".we take huangqiguizhiwuwutang which has definite clinical effection of warming heart-yang,invigorating heart-qi,promoting coronary circulation to observe its influence on vascular smooth muscle cell in ASO rabbit form center to peripheral way through animal experiment and method of fMRI,PCR,Western blot.to detect related brain location with proliferation of VSMC,molecular mechanism of proliferation of VSMC mediate by MAPK. elucidate mechanism of treat in ASO from heart form the whole level,cell level,molecular level and genetic level and reveal part of biological connotation of "the heart governs the blood circulation".

动脉硬化闭塞症（ASO）的发病和血管平滑肌细胞（VSMC）增殖密切相关。丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）家族中细胞外信号调节蛋白激酶1（ERK1）介导的血管活性物质是VSMC增殖的关键。研究发现，ASO的发生与下丘脑和边缘系统的调控中枢有关，但具体的脑区定位和机制尚不清楚。中医认为"心主血脉"，ASO病变虽在脉，但根本在"心"，且从心论治此病，具有好的疗效，推测ASO中MAPK介导的VSMC增殖机制可能是"心主血脉"的分子基础。本课题选取能温心阳、补心血、活血通脉的当归四逆汤，通过动物实验，采用fMRI技术、PCR法、Western blot法，研究其对ASO家兔寒凝血瘀证MAPK介导的VSMC增殖从中枢到外周途径的影响机制。探测影响VSMC增殖的相关脑区、MAPK介导VSMC增殖的分子机制，从整体、细胞、分子、基因水平阐明从心论治ASO的作用机制，揭示"心主血脉"的部分生物学内涵。

目的：本项目着眼于中医“心主血脉”的科学内涵，结合与其相关的典型病症动脉硬化闭塞症（ASO），以ASO寒凝血瘀证MAPK介导的VSMC增殖机制为切入点，选取具有温心阳、补心血、活血通脉作用的方药—当归四逆汤，观察其对ASO家兔寒凝血瘀证从中枢调控脑区、外周途径到效应器官VSMC增殖的作用机制，阐明从心论治法防治ASO的作用途径，并以此揭示“心主血脉”的生物学机制。. 内容和方法：本项目通过体内外实验，采用fMRI技术、PCR法、Western blot法、ELISA法，从整体、细胞、分子、基因水平观察了当归四逆汤对ASO家兔寒凝血瘀证从中枢到外周途径再到VSMC的影响。. 结果：与模型组比较，当归四逆汤能明显改善VSMC的增殖和迁移病理形态；明显抑制VSMC的增殖和迁移；能明显激活下丘脑及边缘系统区域，下丘脑组织中CGRP含量显著升高（P<0.01），NPY、5-HT含量显著降低（P<0.01），外周血中ANP、VIP、6-Keto-PGF1α含量显著升高（P<0.01），TXB2、AngII、PDGF、bFGF含量显著降低（P<0.01）；兔血管平滑肌细胞中ERK1、c-myc蛋白表达明显降低，ERK1mRNA、c-mycmRNA含量明显降低（P<0.01）。. 结论和意义：实验成功建立了动脉硬化闭塞症寒凝血瘀证家兔模型；光镜观察明确了当归四逆汤可改善VSMC的增殖和迁移病理形态；阐明了当归四逆汤治疗ASO的机制可能是通过影响下丘脑及相关神经递质的中枢调控，增强了ANP、VIP、6-Keto-PGF1α血管活性物质的分泌，抑制了AngII、PDGF、bFGF细胞因子的分泌及c-myc基因的表达，并通过抑制MAPK家族中的ERK1细胞信号转导途径，抑制了VSMC的增殖和迁移，是通过干预ASO家兔MAPK介导VSMC增殖的从中枢到外周再到效应器官的整体网络机制防治ASO的。而基于中医“心主血脉”理论认识，亦推断从下丘脑的中枢调控到影响相关血管活性物质、细胞因子、基因表达的外周途径，并通过MAPK家族中的ERK1的介导，影响血和血管生理功能的整体网络机制可能是“心主血脉”的分子基础。不仅为临床应用从心论治法防治ASO寒凝血瘀证提供了一定的科学依据，也为今后深入全面探讨“心”藏象理论内涵提供了科学依据和研究思路。