树鼩Toll样受体家族基因分析及病毒核酸识别相关Toll样受体研究

树鼩是一种有潜力成为理想病毒感染疾病模型的小型灵长类动物，但目前对于树鼩免疫系统尤其是免疫分子基础的认识非常有限，严重限制了其在病毒性疾病方面的研究和应用。目前对人的Toll样受体（Toll-Like Receptor，TLR）研究发现，TLR可识别病毒，参与机体抗病毒的固有性免疫，同时也是促进适应性免疫应答的关键蛋白。迄今为止，尚无关于树鼩TLR公开的分子信息。.该项目拟根据已知哺乳动物13种TLRs的树鼩同源基因克隆入手，获得树鼩TLR分子信息，填补树鼩TLR基因分子信息的空白；在此基础上制备引物、核酸探针和抗体等研究材料，建立一系列研究技术和方法，选择针对识别病毒核酸类TLR，阐明树鼩识别病毒核酸的TLR类别、蛋白结构、组织表达分布特征及其识别病毒核酸的作用。研究结果将为以后应用病毒感染树鼩动物模型开展病毒识别机制和防治策略研究提供理论依据和技术支持，并将促进树鼩实验动物化进程。

本研究采用生物信息学、RACE、qRT-PCR、Western Blot、抗体芯片等技术，对树鼩Toll样受体家族进行了初步分析，首次：(1)发现树鼩Toll样受体家族至少包括10个成员，与Toll样受体家族的组成相似；(2)发现树鼩Toll样受体蛋白组成结构与人Toll样受体在进化上亲缘很近，其功能很可能相同，其中对病毒核酸识别的TLR为TLR3、7、8、9；(3)完成了树鼩管家基因分子GAPDH和ACTB的基因全长序列测定，并在GenBank上发表；建立了这两个分子的qRT-PCR和Western Blot检测方案；(4)发现树鼩TLR8的功能与人TLR8相同，受R848刺激后能上调表达；(5)应用抗体芯片技术大批量筛选了可应用目前市场上商用抗体检测的指标，初步分析了TLR7、8、9受相应刺激剂作用后细胞因子的变化情况。上述结果首次揭示了树鼩TLR家族的基本情况，发现树鼩动物模型在TLR家族研究上相对于啮齿动物有更大的优势，为后续将树鼩作为模式动物应用于病毒感染研究及抗病毒药物研发提供了技术支撑及理论依据。