BaP恶性转化的人成纤维细胞基因表达谱改变和发展抗原扣除法二维电泳技术

在后基因组时代，高通量技术为研究细胞基因表达及环境化学物毒性机制提供了有效的手段。本课题研究苯并（a）芘（BaP）致人胚肺成纤维细胞（HELF）恶性转化的机制。利用微阵列芯片和2D凝胶电泳对正常HELF和恶性转化HELF细胞株进行转录组学和蛋白质组学研究。由于2D凝胶电泳蛋白质分离效率较差，本研究将发展一种新的抗原扣除法2D凝胶电泳，即以G0期HELF作为抗原，制备兔多克隆抗体，利用免疫沉淀法分离HELF各细胞周期新产生的抗原和恶性转化后新表达的抗原，用未被免疫沉淀的抗原进行2D凝胶电泳。此法可进一步提高2D凝胶电泳的蛋白质分离效率并可能发现新的相关蛋白质。此方法与微阵列芯片和全蛋白2D凝胶电泳的结果相结合，将有助于阐明BaP致HELF恶性转化及细胞周期改变的机制。而且对功能表型不同的HELF恶性转化细胞株的遗传学损伤进行鉴定，有助于研究和阐明细胞周期及关卡相关基因的信号传导途径及网络。