自噬在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用及其调控机制

自噬是机体为维持蛋白代谢平衡及内环境稳定启动的溶酶体依赖性降解途径，具有保护细胞和维持生存的功能。我们既往的研究发现血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可以诱导肾小管上皮细胞凋亡，受损的细胞出现异常形态的线粒体、自噬泡和自噬残体，提示自噬特异性降解能力在肾小管上皮细胞病变的发生、发展中起着作用。然而自噬是否能逆转AngⅡ诱导的细胞损伤及其调控机制目前尚不清楚。本研究通过AngⅡ输注动物模型和培养的肾小管上皮细胞，观察AngⅡ对肾小管上皮细胞自噬现象以及自噬分子Atg5、Beclin1及LC3表达的影响；通过阻断自噬通路和RNA干扰技术，评价体内AngⅡ对自噬蛋白及其信号通路AKT和mTOR磷酸化改变的影响；通过体内阻断RAAS，明确自噬在AngⅡ诱导细胞存活改变中的作用以及其对肾间质纤维化发展的影响，试图从细胞自身稳定机制角度揭示肾间质纤维化发病机制，为早期干预与治疗提供新的思路和靶点。

自噬是机体为维持蛋白代谢平衡及内环境稳定启动的溶酶体依赖性降解途径，具有保护细胞和维持生存的功能。我们既往的研究发现病理状态下足细胞和肾小管上皮细胞出现凋亡，受损的细胞出现异常形态的线粒体、自噬泡和自噬残体，提示自噬特异性降解能力在肾脏固有细胞病变中起着重要作用。然而自噬是否能逆转不良因素诱导的细胞损伤及其调控机制目前尚不清楚。本研究模拟糖尿病肾病发病机制，观察高糖对足细胞自噬现象以及自噬分子表达的影响；通过阻断自噬通路评价体内高糖对自噬蛋白及其信号通路AKT和mTOR磷酸化改变的影响；体外模拟造影性肾病，观察造影剂对足细胞以及肾小管上皮细胞形态学改变，研究细胞自噬在造影剂诱导细胞存活改变中的作用；通过体外动物实验观察足细胞自噬与临床表现之间的关系，试图从细胞自身稳定机制角度揭示肾脏发病机制，为早期干预与治疗提供新的思路和靶点。我们发现高糖增加足细胞自噬，同时给予雷帕霉素可增强细胞自噬，3-甲基腺嘌呤则减弱细胞自噬，抗氧化剂亦可抑制高糖诱导的足细胞自噬，其体内ROS生成与高糖呈时间依赖性，进一步证实高糖通过ROS的生成调节细胞自噬；高糖在诱导足细胞自噬增加的同时，足细胞凋亡亦增加，雷帕霉素和P13K抑制剂LY294002均对足细胞自噬具有调节作用，这也说明高糖诱导的足细胞自噬作用部分是通过 P13K/AKT/mTOR信号通路调节实现的；在足细胞对对比剂急性损伤的实验研究中，我们发现自噬在造影剂诱导的足细胞氧化应激损伤起保护性作用，一定程度自噬上调可以减轻其氧化应激水平从而抑制足细胞损伤，这种保护作用也在肾小管上皮细胞中得以体现， 对比剂可以诱导肾小管上皮细胞凋亡和自噬，小剂量对比剂刺激下肾小管上皮细胞自噬和凋亡同时发生，但高峰早于凋亡，在刺激早期一定程度增强自噬可抑制细胞凋亡，反之抑制自噬后细胞凋亡增加。