肝内Th17细胞/调节性T细胞的相互作用及其对非酒精性脂肪性肝炎的影响

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是以肝细胞气球样变性、小叶内炎症和窦周纤维化为特征的代谢性肝病。我们前期研究表明，小鼠脂肪肝内重要免疫调节细胞- - 调节性T细胞（Treg细胞）数量和/或功能显著下降。最近，发现了一类新的独特CD4+ T细胞亚群- - Th17细胞 ，该细胞在多种炎症性和自身免疫性疾病中发挥关键作用。Th17和Treg细胞在发生和功能上呈"此消彼长"的关系。本研究将聚焦于NASH中肝内Th17/Treg细胞平衡变化及其调控，阐述单纯性脂肪肝向NASH发展的免疫学机制。拟回答以下科学问题：① Th17细胞是否为NASH发生发展的关键因素？②NASH中Th17/Treg细胞的相互作用及有关因素（如LPS、脂肪因子等）对该平衡的影响；③能否采用相关药物调控该细胞平衡并缓解肝内炎症？本课题的完成将有助于阐明NASH的发病机制，并为防止NASH 发生发展提供潜在治疗靶点。

目前认为NAFLD是一种与肥胖和代谢综合征密切相关的慢性炎症状态。我们前期研究表明调节性T细胞（Regulatory T cells , Treg细胞）在调控NASH炎症过程中发挥关键作用。作为一种新近发现的促炎性T辅助细胞，Th17细胞与Treg细胞在细胞分化和功能上存在相互拮抗的关系。因此，我们假设Th17细胞参与NAFLD肝细胞脂肪变性和炎症反应过程。本研究分别从动物模型、肝细胞系和人类肝组织水平探讨Th17细胞在 NAFLD 发生中的作用。.方法： 高脂饮食喂饲C57BL6小鼠8周，建立NAFLD小鼠模型，正常小鼠作对照。以油酸、软脂酸处理人肝细胞系（HepG2细胞）以建立脂肪变性细胞模型。.3.采用免疫组织化学法和 Real-time PCR检测正常对照和NAFLD患者肝脏标本中IL-17及其相关基因RORt、IL-23、IL-21等的表达情况。.结果： 1.我们发现喂饲高脂饮食8周的C57BL6小鼠肝脏中Th17细胞频率较正常小鼠显著增高。在正常对照和高脂饮食小鼠，腹腔注射LPS均可显著增加其肝脏中Th17细胞的比例。另外，瘦素可促进小鼠脾脏淋巴细胞中Th17细胞的生成。而用抗体中和IL-17，可以显著减轻LPS诱导的肝损伤，表现为血清ALT水平明显降低，肝脏病理组织切片炎症细胞浸润减少。.2.在体外肝细胞脂肪变模型中，IL-17能够通过阻断胰岛素信号途径而加重细胞脂肪变性，而且IL-17和游离脂肪酸对诱导肝细胞IL-6的产生具有协同效应。.3.免疫组化研究显示，NASH患者肝组织中可见大量IL-17阳性细胞浸润；Real-time PCR 结果表明，Th17细胞相关基因如RORt， IL-17，IL-23， IL-21在NASH患者中的表达量明显高于正常对照。.结论：LPS、瘦素可诱导小鼠肝内Th17细胞产生。IL-17可促进肝细胞IL-6的产生并加重肝细胞脂肪变性。因此，Th17细胞及其细胞因子IL-17可促进NAFLD肝脂肪变和炎症应答，从而促进单纯性脂肪肝向脂肪性肝炎的转变。