基于心肌缺血再灌注研究三参丹颗粒调控内质网应激的作用机制

It is difficult to treat the myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI) in the clinical research.Endoplasmic reticulum stress (ERS) is an important link between apoptosis and autophagy after MIRI. Sanshendan granule is a traditional Chinese medicine patent with the clinical experience from master professor Fujin Duan. Moreover, it has a significant effect on improving the clinical symptoms of patients with ischemic heart disease(IHD), promoting cardiac function and the activity tolerance. Therefore, according to the hypothesis that ‘apoptosis pathway induced by ERS is a target for the treatment of MIRI by sanshendan granule’. This project intends to operate in both vivo and vitro. MIRI rat model and anoxia/reoxygenation cell model are established to observe the apoptosis induced by ERS of myocardial cells via Sanshendan granule intervention. TTC, Tunel, Westernblot and Real- time PCR will be used to observe the change of molecular markers of myocardial cell in various groups. Furthermore, this project will clarify the medical mechanism of Sanshendan granule, and then provide improve a more established theoretical evidence for improving clinical efficacy.

心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的治疗是临床研究的难点。内质网应激（ERS）直接关联心肌缺血再灌注后的细胞凋亡和自噬的重要环节。而三参丹颗粒是国医大师段富津教授多年临床诊治胸痹心痛气虚血瘀证的经验而成，其可减轻患者的临床症状，改善心功能，提高活动耐量而具有保护心肌作用。因此，依据“ERS介导细胞凋亡通路是三参丹颗粒治疗心肌缺血再灌注的的靶点”这一假说，本项目拟从体内、外两方面实验，在大鼠MIRI模型及建立缺氧/复氧心肌细胞模型观察三参丹颗粒干预ERS介导的心肌细胞凋亡的情况，采用TTC法、Tunel法、Westernblot、Real-timePCR等方法观察各组心肌细胞分子标志物变化，为明确三参丹颗粒的药物作用机制，为临床治疗提供更坚定的理论依据。

心肌缺血再灌注（myocardial ischemia/reperfusion injury，MI/R）损伤在心外科手术中经常发生，严重影响手术的成功率及预后。据报道，对炎症反应、纤维化的适度调控是治疗MI/R损伤的有效措施。文献显示，龙血素B（Loureirin B，LrB）是一种具有多种药理活性的黄酮类化合物，可能在心脏氧化应激、凋亡、炎症反应、心脏纤维化等方面起到保护作用，然而LrB对MI/R损伤的治疗作用及分子机制尚不明确。因此，本项目采用TTC染色、ELISA、Masson染色、Western blot、免疫荧光、Real-time PCR等多种检测手段以及慢病毒技术从体内、体外两个水平对LrB的治疗作用及相应的分子机制进行了探究。本研究通过左前降支冠状动脉结扎法建立MI/R小鼠模型并用0.5 mg/kg或1 mg/kg LrB治疗4周，结果显示，LrB能够显著改善MI/R小鼠的左心室功能，减少心肌梗死面积，降低心肌组织中MI/R诱导的炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达，下调fibronectin、Collagen I、Collagen III的表达并抑制胶原纤维沉积。进一步的机制研究表明，LrB治疗抑制MI/R小鼠心肌组织中PAI-1、TGF-β1、p-Smad2/3的表达，增加u-PA、t-PA的水平，表明LrB可能通过抑制PAI-1/TGF-β/Smad信号通路发挥治疗MI/R的功能。之后本研究通过建立Ang II诱导的细胞模型进一步证明了LrB的作用机制，与动物实验结果一致，细胞结果也显示LrB治疗抑制Ang II诱导的细胞模型中PAI-1、TGF-β1、p-Smad2/3、fibronectin、Collagen I、Collagen III的表达，PAI-1过表达消除了LrB对Ang II诱导的CF细胞的影响，进一步证明了LrB可能通过抑制PAI-1/TGF-β/Smad信号通路发挥治疗功能。综上所述，本研究证实了LrB能够减轻MI/R损伤，进一步揭示了MI/R损伤分子机制并为MI/R损伤的治疗提供了一种潜在药物。