通用型流感病毒样颗粒诱导肺组织定居记忆性T细胞活化的黏膜免疫机制

The development of universal influenza vaccines with protective effects on different subtypes of influenza viruses has become a hot topic in the industry. Lung tissue resident memory T cells (TRM) play an important role in anti-influenza. We have successfully constructed three universal influenza VLPs by using baculovirus expression system, including the conservative region short peptide of H5N1 influenza HA, membrane protein M2e, nucleoprotein NP conservative region short peptide and matrix protein M1. The universal influenza VLPs have demonstrated stronger immune responses, increasing survival rate of mice against H1N1, H3N2, H5N1 and H7N7 influenza viruses challenge through intranasally immuniztion. In this study, ①we will observe survival rate of mice intramuscularly immuniztion of universal influenza VLPs. ② And we will observe the impact of universal influenza VLPs on the lung TRM quantity, distribution and activation of mice, the cytokines of the mucosal tissue and their downstream signal transduction pathways. ③And we will detect and separate lung TRM after sensitization through flow cytometry. Respectively, transfer or inhibit the lung TRM. We will observe the effect of lung TRM on the protection rate after influenza challenge. The main objective of this study is to reveal the immunodulatory mechanism of lung TRM of universal influenza VLPs through cell and molecular level and form the theoretical basis for the development of the universal influenza vaccine.

研制对不同亚型流感病毒均有保护作用的通用型流感疫苗为业界热点，据研究肺组织定居记忆性T细胞（TRM）在抗流感中发挥重要作用。前期我们利用昆虫杆状病毒表达系统，以H5N1流感病毒血凝素HA保守区短肽、膜蛋白M2e、核蛋白NP保守区短肽和基质蛋白M1成功构建了三种通用型流感病毒样颗粒，通过滴鼻黏膜免疫诱导产生了较强的免疫反应，提高了小鼠对H1N1、H3N2、H5N1和H7N7亚型流感病毒的攻毒保护率。本研究拟①明确滴鼻黏膜免疫通用型流感病毒样颗粒后小鼠的攻毒保护率；②观察通用型流感病毒样颗粒对小鼠肺TRM数量、分布和活化度，黏膜组织中细胞因子及其下游信号转导通路的影响；③分离致敏后的肺TRM，通过过继转输或阻断技术，观察肺TRM对流感攻毒保护率的影响。本研究旨在分子和细胞水平上探讨通用型流感病毒样颗粒对肺TRM的免疫调节机理，为开发通用型流感疫苗提供理论依据。

流行性感冒，简称流感（Influenza），是由流感病毒感染引起的一种急性呼吸道传染病，严重危害人类和动物健康。疫苗是预防流感病毒传播的最有效途径，当疫苗毒株与流行毒株不匹配时，会导致流感的发病率和死亡率增加，严重时甚至发生流感大流行。因此，研制能够保护多种亚型流感病毒的通用型流感疫苗成为研究热点。实验结果：（1）本研究利用昆虫杆状病毒真核表达系统构建包含 HA 保守区短肽、M2e、NP 保守区短肽和 M1 蛋白的mHA、cHA 和 sHA三种通用型流感病毒样颗粒，通过滴鼻免疫小鼠，sHA-VLPs可诱导较强的免疫反应。针对不同亚型的流感病毒，不仅能诱导小鼠产生以IgG2a亚型为主的体液免疫反应、以 IFN-γ 为主的细胞免疫反应和血凝抑制抗体，还能诱导黏膜免疫反应。并且诱导CD8+T细胞为主TRM细胞（组织定居记忆性T细胞）和TCM细胞（中央记忆型T细胞）的产生。（2）滴鼻免疫构建的通用型流感病毒样颗粒sHA-VLPs在PD-L1+4-1BB刺激下，能提高免疫原性，并产生针对异源流感病毒的较好的保护作用，而FTY720则并不能起到良好的促进作用，反而会抑制流感病毒样颗粒sHA-VLPs的保护效果。（3）建立了TRM细胞和TCM细胞分选体系，小鼠实验证明，过继转输TRM与TCM细胞，均能产生一定的针对异源流感病毒的保护作用，而过继转输TRM细胞保护效果更明显，明确肺了TRM在提高流感攻毒保护率中的作用。本研究在分子和细胞水平上探讨通用型流感病毒样颗粒对肺TRM的免疫调节机理，为开发通用型流感疫苗提供前期数据。