锚定性抗肝癌DNA疫苗的制备和功能研究

为改善当前原发性肝癌疗效差的现状，探索治疗新方法。应用蛋白质工程技术原理将肝癌细胞膜上GPI锚定蛋白GPC3 cDNA序列N末端与AFP抗原决定簇hAFP542-550DNA片段连接，分别构建含AFP启动子的两个重组质粒pcGPC3-GFP-hAFP542-550 和pcGPC3 -hAFP542-550-GFP。脂质体转染质粒至肝癌细胞株HepG2和Hep3B，表达融合蛋白GPC3-hAFP542-550，使hAFP542-550靶向锚定表达在分泌AFP的肝癌细胞膜上，修饰癌细胞膜表面，增强其免疫原性。筛选稳定表达GPC3-hAFP542-550细胞克隆与正常人外周血分离的淋巴细胞共培养。在体外，采用MTT法和TUNEL法分别检测肝癌细胞的存活数及凋亡数并统计学处理；应用3种经典方法检测激活淋巴细胞的免疫效应。在体内，制作肝癌裸鼠模型，检测混合细胞对肿瘤的消退和裸鼠生长及存活率的影响。