肾脏特异性miR-215调控Smad7在DN肾小球硬化发生中的作用研究

微小RNA(microRNA)是一类内源性非编码小分子RNA，最新的研究表明它们与糖尿病肾病（DN）的发生、发展密切相关，但机制不清。本课题在前期研究DN小鼠肾脏特异性miRNAs表达谱的基础上，选取经我们实验证实在DN肾组织内表达显著上调的miR-215为切入点，利用其前体的慢病毒表达载体或特异性拮抗分子（antagomir），升高或抑制系膜细胞miR-215表达，观察miR-215对高低糖条件下系膜细胞表型和功能的影响，研究其对靶基因Smad7的调控及涉及的相关信号转导通路；进而在体内观察DN进展过程中miR-215时空表达规律；并通过体内注射antagomir构建miR-215基因沉默的DN小鼠模型，从整体水平探讨miR-215表达缺失对早期DN肾小球硬化的影响和作用机制。本研究对于阐明miR-215在DN发病中的作用具有重要的理论意义，并为DN早期诊断治疗提供新的思路和靶点。

系膜细胞表型转化在糖尿病肾病的发病过程中至关重要，目前认为TGF-β1是介导高糖诱导的系膜细胞表型转化的主要刺激因子。本课题聚焦于研究miR-215在TGF-β1介导的系膜细胞表型转化中的作用。通过实时定量RT-PCR及Northern Blot证实了在体内外高糖环境下miR-192/215显著上调。应用gain- and loss-of-function的研究方法，通过特异的抑制剂使miR-215下调后，TGF-β1介导的小鼠肾小球系膜细胞的表型转化也随之受抑；而利用miR-215模拟物则促进了系膜细胞的表型转化。然而，利用TGF-β1预处理细胞后，上述作用消失。以上结果表明miR-215参与了TGF-β1介导的系膜细胞表型转化。同时，我们应用在线靶基因预测软件预测及双荧光素酶报告证实了CTNNBIP1是miR-215的靶基因。既往研究提示CTNNBIP1是Wnt/β-catenin信号通路的重要抑制因子，而本研究进一步证实了miR-215通过抑制CTNNBIP1表达从而提高TGF-β1处理后的系膜细胞内β-catenin的活性以及α-SMA、fibronectin的表达。另外，利用db/db小鼠进行动物研究发现，通过antagomir体内沉默miR-215使小鼠肾小球内CTNNBIP1蛋白表达显著升高，并由此导致β-catenin活性降低，α-SMA、fibronectin的表达下调。综上所述，本研究提示miR-215通过调节CTNNBIP1-Wnt/β-catenin信号通路在系膜细胞的表型转化中发挥了重要作用，从而参与了糖尿病肾病的发生发展。.利用本课题经费的支持，已培养硕士研究生一名（已获得硕士学位，并已发表相关论文）、博士研究生一名（在读）。本研究的部分结果已发表在《中华肾脏病杂志》上。另一部分研究结果总结成文后投往SCI 收录期刊 PLOS ONE，已被接受。