祛风通络方介导的微环境下肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4变化规律研究

中药药效的发挥除其中的主化学成分和活性物质外，其物理性能如温度、酸碱性也发挥着特定作用。细胞的某些温度感受通道是否能感知中药的寒热性能？于此我们研究：祛风通络方和加味方的寒温极性；肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4对祛风通络风及加味方寒温性能的感受机理。采用体外研究和动物实验方法，以转化生长因子β1诱导的大鼠远曲小管上皮细胞为研究对象，以不同温度梯度为对照，设立祛风通络方、辛温祛风通络方、辛凉祛风通络方、附子、黄连等研究组，通过生物热活性监测系统,揭示不同祛风通络方寒热药性的客观性；以单侧输尿管结扎模型大鼠为对象，通过Western blot、RT-PCR等方法检测不同祛风通络方干预下肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4蛋白和mRNA表达变化，探讨寒温祛风通络方介导的微环境下肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4变化规律，初步揭示中药药性的治疗意义，为辨证基础上祛风通络方的应用寻找理论依据。

中药药效的发挥除其中的主化学成分和活性物质外，其物理性能如温度、酸碱性也发挥着特定作用。此作用可能是以细胞上的温度感受器为目标靶点而感知的。于此我们提出新的思路：祛风通络方和加味方的寒温极性研究；肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4对祛风通络风及加味方寒温性能的感受机理。研究采用体内外相结合的方法，体外实验以TGF-β1诱导的大鼠远曲小管上皮细胞为研究对象，通过生物热活性监测系统,揭示不同祛风通络方寒热药性的客观性；体内试验以UUO模型大鼠为研究对象，研究肾小管上皮细胞温度感受器TRPV4是否参与感受寒热药性及对肾小管上皮细胞功能（转分化）的影响。研究初步证实了附子性热，黄连性寒的中药药性理论，发现UUO大鼠肾小管上皮细胞上温度感受通道TRPV4表达较正常大鼠增多，温热祛风通络方可上调TRPV4的表达，寒凉祛风通络方可下调其表达，祛风通络方及寒温加味方可抑制肾组织α-SMA、Vimentin的表达，且Vimentin与TRPV4之间呈正性相关趋势，初步提示TRPV4可能作为新的治疗靶点，在肾病的中医药治疗中发挥独特作用。