CDV强毒株H蛋白抑制β干扰素产生的分子机制

Canine distemper virus (CDV) hemagglutinin (H) protein plays an important role in virus infection, pathogenicity and immunosuppression. The virulence of the virus is closely related to the ability of the virus to escape the host immune response. The H protein of virulent CDV inhibited β interferon-inducing activity to a far greater extent than attenuated CDV. The detail mechanisms by which the primary β interferon-inducing activity is impaired by H protein of virulent CDV still remain unexplained. In this study, the specific signal pathways and the key molecules acting on signaling pathway, which were inhibited and targeted by virulent CDV H protien, were identified and screened. The interaction mechanisms of the key molecules and virulent CDV H protein were analyzed. The key domains and amino acids mutation of CDV H protein, which were responsible for suppression of β interferon-induction activity, were identified. This will provide direct esperimental evidences to understand the pathological mechanism and host-virus interaction in CDV infection, which will be very important for the development of novel antiviral drugs and vaccines for the prevention of CDV infection.

犬瘟热病毒（CDV）血凝素（H）蛋白在病毒感染、致病性和免疫抑制等方面发挥重要作用。病毒致病性的强弱与病毒逃逸宿主免疫应答的能力密切相关。前期研究显示，与CDV弱毒株相比，CDV强毒株H蛋白能够显著抑制β干扰素的产生，但是详细机制不明。本项目鉴定CDV强毒株H蛋白抑制β干扰素产生的具体信号通路，筛选CDV强毒株H蛋白作用的β干扰素信号通路关键靶标分子；进一步分析CDV强毒株H蛋白与β干扰素产生信号通路关键靶标分子的作用机制；鉴定CDV强毒株H蛋白抑制β干扰素产生的关键结构域，比较CDV强弱毒株在该结构域的氨基酸变异，探寻影响CDV H蛋白抑制β干扰素产生的氨基酸变异位点。通过上述研究，阐明CDV强毒株H蛋白抑制β干扰素产生的分子机制，进一步了解免疫抑制疾病的发病机制，为诊断、预防和治疗免疫抑制疾病提供理论基础和药物靶点。

犬瘟热病毒（CDV）血凝素（H）蛋白在病毒感染、致病性和免疫抑制等方面发挥重要作用。与CDV弱毒株相比，CDV强毒株H蛋白能够显著抑制β干扰素的产生，但是详细机制不明。为研究CDV强毒株H蛋白对β干扰素信号通路的影响，用双荧光素酶报告基因实验检测不同CDV毒株H蛋白对β干扰素的影响以及RIG-I（N）、MAVS、TBK1和IKK-i等信号分子介导信号通路的影响，鉴定CDV强毒株H蛋白抑制β干扰素产生的关键结构域，激光共聚焦试验和GST-pull down试验检测CDV H蛋白与信号通路关键分子的相互作用。在中国首次分离到Asia-4型CDV毒株和全基因组序列，丰富了我国CDV的分子流行病学。CDV强毒株H蛋白特异地抑制RIG-I介导的β干扰素转录活性，其N端结构域（1-462 bp）是抑制β干扰素转录活性的关键结构域；激光共聚焦试验显示CDV强毒株H蛋白与RIG-I（N）在细胞质中存在共定位现象；GST-pull down试验证明CDV强毒株H蛋白与RIG-I（N）存在直接的相互作用。Co-IP和质谱鉴定了CDV强弱毒株H蛋白与宿主蛋白互作差异组学，生物信息学分析CDV H蛋白主要涉及宿主的内质网应激，CDV强毒株H蛋白与宿主天然免疫反应负调节因子PSMA7蛋白存在相互作用。发现CDV强毒株H蛋白在细胞中的蛋白水平比CDV弱毒株多，与CDV强弱毒株H蛋白与宿主E3泛素连接酶Hrd1互作差异有关。为进一步了解免疫抑制疾病的发病机制和制定该病防控新策略提供理论基础和药物靶点。在用单克隆抗体检测CDV H蛋白时，筛选到鉴别CDV强弱毒株的抗H蛋白单克隆抗体和中和抗原表位，为区分CDV强弱毒株提供必要的工具，对于CDV诊断试剂和疫苗的制备具有十分重要的意义。