石菖蒲有效成分调控ERK1/2-CREB信号通路对抑郁症神经保护作用的研究

抑郁症的发生与海马神经元再生障碍密切相关，ERK1/2-CREB信号通路是抑郁症神经元再生的关键环节之一，同时也是抗抑郁治疗的重要靶点。石菖蒲是治疗脑病的中药方剂中出现频率最高的少数几味中药之一，治疗抑郁症具有很好的临床基础。本项目以神经元再生与保护为切入点，拟采用慢性不可预知性轻度应激动物模型和皮质酮损伤神经细胞模型，通过免疫荧光双标法、细胞凋亡检测术、Western Blot、实时定量PCR、RNAi、工具药信号通路阻断等实验方法和手段，从动物、细胞和分子水平多层次系统探讨石菖蒲活性成分通过促进神经元再生和神经保护发挥抗抑郁的作用。揭示石菖蒲活性成分对ERK1/2-CREB信号通路的调控作用及其关键靶点，将为抑郁症防治提供新的有效手段，为研发有效的抗抑郁新药开拓新思路，具有重要的科学意义和广阔的应用前景。

抑郁症的发生与海马神经元再生障碍密切相关，ERK1/2-CREB信号通路是抑郁症神经元再生的关键环节之一，同时也是抗抑郁治疗的重要靶点。石菖蒲是治疗脑病的中药方剂中出现频率最高的少数几味中药之一，治疗抑郁症具有很好的临床基础。本项目以神经元再生与保护为切入点，拟采用慢性不可预知性轻度应激动物模型和皮质酮损伤神经细胞模型，通过免疫荧光双标法、细胞凋亡检测术、Western Blot、实时定量PCR、RNAi、工具药信号通路阻断等实验方法和手段，从动物、细胞和分子水平多层次系统探讨石菖蒲活性成分通过促进神经元再生和神经保护发挥抗抑郁的作用。行为学研究结果显示，抑郁症造模后，与空白对照组相比，模型组大鼠行为学指标明显降低（P﹤0.05），与模型组比较，氟西汀组和β-细辛醚组大鼠行为学指标明显改善；免疫组织化学检测结果显示，与空白对照组相比，模型组海马区CREB、BDNF、Trk-B、Bcl-2、MAPK、MEK和p-ERK的表达均明显降低（P﹤0.05），Bax的表达则增高（P﹤0.05），而与模型组相比，氟西汀组和β-细辛醚组的表达则增强（P﹤0.05），而Bax的表达则减弱（P﹤0.05）；实时定量PCR检测结果显示，与空白对照组相比，模型组海马区的CREB、BDNF、TrkB、MEK和ERK的基因水平表达减弱(P﹤0.05)，而氟西汀组和β-细辛醚组的表达则增强（P﹤0.05）；Western blot检测结果显示，与空白对照组相比，模型组MEK、p-MRK、ERK、p-CREB、CREB、BDNF、TrkB、Bcl-2，Bad蛋白表达水平均降低(P﹤0.05)，氟西汀组和β-细辛醚组的蛋白表达则增强(P﹤0.05)；流式细胞术及TUNEL法检测结果显示：与空白对照组相比，模型组大鼠海马CA3、DG区出现典型的凋亡细胞，且凋亡率与凋亡细胞数量有明显差异，而与模型组相比，β-细辛醚组与氟西汀组海马区凋亡细胞数量及凋亡率明显降低(P﹤0.05)。上述研究结果显示，ERK1/2-CREB信号通路可通过特定丝/苏氨酸残基的磷酸化，Raf、MEK、ERK1/2蛋白依次被活化，活化的ERK1/2可从胞浆移位至细胞核直接磷酸化CREB，促使目标基因转录活化，导致Bcl-2等抑制凋亡的相关基因表达，进而促进神经元存活；而石菖蒲的有效成分β-细辛醚则可通过调控ERK1/2-CREB信