十二指肠钩虫抗凝肽的作用机制及其组织定位

钩虫分泌的抗凝肽能阻止钩虫咬附宿主伤口的血液凝固，利于钩虫吸血，并导致伤口流血不止，是钩虫主要致病因子，也是钩虫适应吸血寄生生活的重要分子。而且钩虫抗凝肽具有独特抗凝作用，还可能开发为抗凝抗栓新药。但目前对人体寄生钩虫中的抗凝肽研究仅限于本课题组的部分前期工作。本项目在前期从人体主要寄生钩虫－十二指肠钩虫中分离获得8 种抗凝肽，它们可能是十二指肠钩虫成虫中全部抗凝肽。本项目拟在此基础上，全面而系统地阐明十二指肠钩虫抗凝肽抗凝作用机制，并结合免疫组化技术及原位杂交技术了解他们在虫体中的分布部位，以揭示它们在虫体适应吸血寄生生活中发挥的生理作用。本项目对于深入阐明十二指肠钩虫致病的分子机制，揭示各十二指肠钩虫抗凝肽的生理学功能具有重要意义，并将为十二指肠钩虫抗凝肽作为具有自主知识产权的抗凝抗栓新药开发奠定基础。

钩虫分泌的抗凝肽能阻止钩虫咬附宿主伤口的血液凝固，是钩虫主要致病因子。而且钩虫抗凝肽具有独特抗凝作用，还可能开发为抗凝抗栓新药。本项目从人体主要寄生钩虫－十二指肠钩虫中分离获得了8 种抗凝肽，至目前，国内外只有本项目组前期报道了其中2种十二指肠钩虫抗凝肽（AduNAP）-AduNAP4和AduNAP7，以及AduNAP4的抗凝作用机制。通过本项目研究，①进一步明确了其他AduNAP的抗凝作用机制，提示十二指肠钩虫是通过抑制凝血因子fVIIa/TF、Xa（fXa）、或fXIa发挥抗凝作用的，对于揭示十二指肠钩虫引起贫血的致病分子机制具有重要科学价值；②明确了AduNAP2及AduNAP3对凝血因子XIa（fXIa）具有较强的抑制作用，而fXIa是近年引起重视的抗凝抗栓新靶点，具有出血副作用小的优势，因此，研究构建了AduNAP2的系列突变体，经过突变体的重组制备、体外抗凝活性及机制研究，基本明确了AduNAP2抑制fXIa的关键氨基酸位点，为基于AduNAP的结构研发针对fXIa靶点的具有完全自主知识产权的抗凝抗栓新药奠定基础；③初步研究了AduNAP1及AduNAP3的抗大鼠血栓形成的药效学，通过抗大鼠颈总动脉血栓的作用、对小鼠断尾出血的影响和小鼠急性毒性实验表明，rAduNAP3具有明显的抗血栓形成作用且不会引起小鼠的明显急性毒性，但对小鼠正常止血功能有一定影响，可能会引起岀血副作用。④已委托生物技术公司制备8种AduNAP的单克隆抗体，关于各AduNAP在虫体中的组织定位的实验正在进行中。