p62影响食管癌细胞凋亡的分子机制研究

We recently found that p62 was upregulated in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissues, and that p62 overexpression was positively correlated with poor prognosis. Preliminary functional analysis suggested that p62 enhance the apoptosis resistance of ESCC cells by inhibiting the ubiquitination degradation of SKP2 probably via interaction with PKCiota. However, the mechanisms that p62 enhances the apoptosis resistance of ESCC cells remain to be clarified. Basis on these previous findings, we will further investigate the detail of the interaction between p62 and PKCiota, the functional role of PKCiota on SKP2 in p62-mediated apoptosis resistance by using molecular biology, cell biology and biochemistry methods. This project can contribute to the elucidation of the molecular basis underlying the anti-apoptosis ability of ESCC cells and also provide candidate molecular targets for the therapy of ESCC.

我们在前期工作中发现，p62在食管癌组织中显著过表达，并且与患者不良预后正相关；p62通过正调SKP2表达水平而增强食管癌细胞的抗凋亡能力；同时还发现PKCiota正调SKP2、p62正调PKCiota蛋白水平。但是，p62、PKCiota、SKP2之间的确切关系及p62调控食管癌细胞抗凋亡的分子机制尚不清楚。为此，本项目拟在前期工作基础上，利用分子生物学和细胞生物学技术，在细胞水平、动物模型及食管癌组织标本中进行深入研究，揭示p62对PKCiota、SKP2调控的分子基础以及p62增强食管癌细胞凋亡抗性的详细分子机制，明确食管癌临床标本中p62通路关键分子异常表达的相关性、以及与患者临床病理参数和预后的关系。本项目将有助于阐明食管癌细胞凋亡抵抗的机理，并为食管癌的诊断和治疗提供分子标志和干预靶点。

食管癌死亡率高，预后差。在前期工作中，我们发现p62在食管癌组织中显著异常表达，并与患者的不良预后正相关。功能和机制研究提示，p62在无血清培养下通过抑制SKP2蛋白的泛素化降解，上调SKP2蛋白水平，进而增强食管癌细胞的抗凋亡能力；前期研究还发现，p62与PKCiota存在相互作用，正调PKCiota的蛋白水平，进而正调SKP2的蛋白水平。. 本项目的主要研究内容为：研究揭示p62对PKCiota、SKP2调控的分子基础以及p62增强食管癌细胞凋亡抗性的详细分子机制，研究针对p62相关信号通路的靶向抑制效果，明确食管癌临床标本中p62通路关键分子异常表达的相关性、以及与患者临床病理参数和预后的关系。. 本项目取得了重要进展，包括：发现p62在包括T1N0M0的食管癌组织中主要定位于细胞浆，而在正常的食管上皮组织中主要定位于细胞核，p62的核浆易位可能为食管癌发生发展中的一个较早期事件；在无血清培养条件下敲降p62后，食管癌细胞中促凋亡分子PARP和caspase 9被激活，而抗凋亡分子Mcl-1的蛋白水平降低；p62蛋白通过其PB1结构域与PKCiota相互作用，抑制SKP2的泛素化蛋白降解，上调SKP2蛋白表达，进而增强食管癌细胞的抗凋亡能力，促进食管癌裸鼠移植瘤生长；p62-siRNA与PKCiota抑制剂ATM联合，促进食管癌细胞凋亡，抑制克隆形成；胞浆表达的p62促进食管癌细胞的侵袭运动和肿瘤转移；T269和S272位点磷酸化负责p62在细胞核中的定位，S332位点磷酸化负责p62在细胞浆中的定位；p62与EPLIN、GSK3β和CDK1存在相互作用，胞浆表达的p62可上调EPLIN和GSK3β蛋白水平，进而影响食管癌细胞的侵袭运动；p62、EPLIN和GSK-3β在多种肿瘤中都存在高表达，且高表达的患者预后较差。这些研究结果的一部分已发表于Oncogene杂志。本项目进一步明确了食管癌细胞凋亡抵抗的机理，并为食管癌的诊断和治疗提供了候选分子标志和干预靶点。