硫化修饰引物结合Pfu聚合酶的荧光定量PCR体系在Caveolin－1基因剪接多样性中的建立及应用

人类绝大多数基因存在mRNA可变剪接形式，而错误的剪接常常是肿瘤与遗传疾病的直接诱因。mRNA的可变剪接表达研究对于后基因组时代阐明基因的功能多样性至关重要。申请者在前期工作中发现硫化修饰引物结合Pfu校正活性聚合酶构成的PCR体系，该体系能使成百上千倍的同源序列的非特异扩增得到遏制，在没有降低PCR灵敏度的前提下，大大提高了PCR反应的特异性，结合SYBR? Green I荧光染料构成的Real－time PCR无需特殊分子探针和分子信标技术可望实现对基因表达的精确分析。可创建高精度、新型荧光定量DD－PCR法；并已利用该技术顺利克隆了Caveolin－1基因能诱导肿瘤细胞凋亡和促进生长的3种不同mRNA剪接方式。据此，申请者拟构建荧光定量mRNA可变剪接筛选技术平台，研究Caveolin－1基因在正常肝、心、肾等多种组织和临床肝癌标本中可变剪接形式及功能。