基于表观遗传学对内蒙古特禀体质家族人群的基础性研究

A basic study of the genetic mechanism of intrinsic constitution family based on Epigenetics will be done with the method of clinical epidemiological investigation. In the research, firstly,two groups with intrinsic constitution and moderate constitution should be chosen as the objects, whose DNA and total RNA will be extracted from their peripheral blood samples;secondly, significantly different target genes related to intrinsic constitution will be screened out by applying gene expression profile chip technology to the test of the total RNA of the blood samples; thirdly, the target genes will be screened again by applying RT-qPCR technology to the verification of the results of gene expression profile chip; fourthly,the DNA methylation level of the promoter region of the target genes will be tested by applying mass spectrometry techniques; finally,the correlation between the DNA methylation level and the RNA expression level of the target genes will be tested by applying statistic methods. The research will elucidate the genetic mechanisms and the genetic differences of the population with intrinsi constitution from the Angle of molecular, aiming to provide new ideas and new methods of the prevention of intrinsic constitution, enrich micro-theories of intrinsic constitution and promot the development of TCM constitution

采用临床流行病学调查的方式，进行基于表观遗传学对内蒙古特禀体质家族人群的基础性研究，本试验首先需要筛选出特禀体质(包含其一级亲属)和平和体质人群作为研究对象，并采集每个个体的外周血样本，提取DNA和总RNA；应用基因表达谱芯片技术检测其总RNA，筛选出表达水平具有显著性差异且与特禀体质相关的目标基因；应用荧光定量PCR技术（RT-qPCR）验证表达谱芯片的结果，并对目标基因进行二次筛选；应用Massarray质谱技术，检测目标基因启动子区的DNA甲基化水平；应用统计学方法，检验目标基因DNA甲基化水平与其RNA表达水平之间的关联性。进而阐明特禀体质家族人群的遗传机制，并从分子角度阐释特禀体质人群基因水平上的差异性，从而为特禀体质的预防提供新思路、新途径，同时也丰富了体质学微观理论知识，促进了中医体质学的发展。

项目背景：中医体质学是研究人体客观生命现象的一门学科，具有反应人体生理和形态学特征的特点，在疾病的预防治疗中具有重要意义。中国中医学国医大师王琦教授对中医体质学认识颇深，将中国汉人人群分为9种体质，特禀体质作为相对于平和体质的失衡体质，是中医9种体质之一。特禀体质状态下与很多疾病的发生发展具有相关性，且该体质易受遗传-环境-地域等多种复杂因数影响。为研究特禀体质的差异表达基因，验证特禀体质的家族遗传性，我们开展本次项目研究。.研究内容：本次项目课题组以内蒙古特禀体质人群为研究对象，以转录组测序、DNA甲基化测定、全基因组外显子测序（WES）技术为切入点，筛选特禀体质人群突变基因位点，验证特禀体质的家族遗传性倾向。.重要结果：特禀体质与平和体质在HLA-DRB1、HLA-DRB5和HLA-DQA2 3个基因呈现差异性表达；特禀体质与平和体质人群对比在基因XKR6、PLCL1、LTC4S及FLG均表现为高度甲基化；三代均有特禀体质的家系中共存ZYG11A（rs190484906）和LOXL2（rs142252012）的突变，说明特禀体质具有家族遗传性倾向。.关键技术：采集特禀体质人员的外周血，提取RNA，筛选出表达水平具有显著性差异且与特禀体质相关的目标基因；检测目标基因启动子区的DNA甲基化水平；筛选出特禀体质人群高度甲基化的突变基因；运用全基因外显子测序筛选特禀体质家系共存的突变基因位点，证明特禀体质的家族遗传性。.科学意义：本次研究为特禀体质的研究奠定基因组学的基础，对于指导临床处方用药、从体质角度防治特禀体质状态下罹患的各种疾病具有深远意义。