利用基因敲除小鼠研究ABRO1生理功能

Gene knockout mice is an ideal animal model for the study of new genes physiological function. ABRO1 has been reported to serve as a scaffold protein and recruit the rest of components(NBA1,BRE and BRCC36) of the BRISC enzyme. However, we didn't know much about ABRO1's function until now.My previous studies show that ABRO1 is a new regulator of p53, stabilizing p53 by recruitment of USP7,inhibiting the tumor proliferation. This study aims to analyze the effcts and the mode of function of ABRO1 gene knockout on embryo development, tumor susceptibility,cardiac damage and kidney damage protection and DNA damage repair by the research on ABRO1 gene knockout mice.By separating MEF cell of the mice through FCM， I analyze the effect of ABRO1 knockout on cell growth, proliferation and apoptosis.By detecting the active change of p53 I study whether ABRO1's function is depend on p53.

基因敲除小鼠是研究新基因生理功能的理想动物模型。ABRO1作为一个支架分子募集NBA1、BRE和BRCC36等组成BRISC复合体,抑制心肌细胞K63-链接的泛素化，参与心肌保护。目前对ABRO1的功能了解甚少，我们的前期研究结果表明ABRO1是一个新型p53调节分子，通过募集USP7稳定p53蛋白，抑制肿瘤增殖。本研究拟制备ABRO1基因敲除小鼠，通过表型分析确定ABRO1敲除对胚胎发育、肿瘤易感性、心肌保护、急性肾损伤和DNA损伤修复等多方面的影响，并探讨其作用机制。通过分离小鼠MEF细胞，应用流式细胞术分析ABRO1敲除对细胞生长、增殖和凋亡的影响，检测p53活性的变化，研究ABRO1发挥生理功能是否依赖p53。

ABRO1,也被称为KIAA0157和FAM175B，定位于 10 q26.13号染色体上。目前关于它的功能了解很少。最近的一项研究表明ABRO1参与BRISC复合体(BRCC36-containing isopeptidase complex)的形成。BRISC复合体由多种蛋白组成，特异性剪切K63连接的泛素链。ABRO1作为一个中央支架蛋白组装并促进BRISC复合体的催化作用。ABRO1和CCDC98 / Abraxas有39%的序列同源性，都包含了一个与NBA1、BRE和BRCC36相互作用的结构域。 CCDC98是BRCA-1的相互作用蛋白质，它是应答电离辐射形成BRCA1 DNA损伤点所必须的。因此，CCDC98在辐射敏感性和DNA损伤诱导的G2/M关卡控制扮演了一个重要角色。虽然ABRO1与CCDC98具有较高同源性，但是ABRO1 C-端缺乏识别BRCA1的BRCT结构域的PSXXF基序，所以，ABRO1不能结合BRCA1。到目前为止，没有研究表明ABRO1是否参与细胞的DNA损伤反应。最近，ABRO1被报道与控制G2/M期和细胞凋亡的锌指转录因子THAP5相互作用。在心肌细胞中，增加ABRO1表达显著降低特异靶蛋白K63链接泛素化并减少细胞损伤和细胞死亡。去泛素化酶以及与之相关的蛋白复合体的蛋白质组学分析表明USP7可能结合ABRO1。 . 在本项研究中，我们的结果证实ABRO1可与USP7，p53形成蛋白质复合体，促进USP7 和p53的相互作用，去泛素化p53，结果是增加p53稳定性，致细胞周期阻滞。在非应激条件下，ABRO1主要定位于细胞质。DNA损伤时，ABRO1表达增加，并转位入核参与p53 的活化。我们的结果揭示ABRO1是一个新的p53调节分子，在调节细胞增殖和DNA损伤应急反应中起重要作用。. 利用同源重组技术建立了ABRO1敲除小鼠，研究发现敲除ABRO1之后，不影响小鼠的正常生长发育。敲除ABRO1促进中性粒细胞在腹腔中的募集，降低CLP导致的系统性炎症反应。进一步机制研究表明，敲除ABRO1增强CXCR2受体活化，促进CXCR2介导的中性粒细胞的迁移，敲除ABRO1抑制NLRP3-ASC-Caspase1复合体的组装，抑制NLRP3炎症炎症小体的活化。表明ABRO1可能是一个新型的炎症调控因子。