基于微透析及UPLC-Q/TOF-MS技术的组分复方平颤宁在帕金森模型大鼠纹状体内的PK-PD相关性研究

Due to a high trend of Parkinson disease in recent years, there are no ideal drugs for curing it, however, traditional Chinese medicine for Parkinson disease with valid efficacies and obvious advantages, get more and more attentions over the world. PK/PD model could comprehensively clarify the three-dimensional relation model of drug concentration in target sites, drug effects, and time, which will become the key approach of drug evaluation in future. Based on the previous studies, with the application of UPLC MD-Q/TOF-MS technology combined with MSE mass spectrum data acquisition pattern, the PK-PD model of Fu fang ping chan ning (eleutherosides, herbaceous peony total glucoside, rhomotoxine) in the corpus striatum of Parkinson's model rats are studied. Chosen dopamine as index, the concentration-time curves of eleutheroside B, isofraxidin, paeoniflorin, rhynchophylline, isorhy in the corpus striatum are studied, and the pharmacokinetic parameters are caculated by 3P97 software. According to the weight coefficient (ωj) of each component in the formula, the comprehensive concentrations in this fomula is caculated and adjusted, further integrated the pharmacokinetic parameters. Regression analysis are carried out between the fomula comprehensive concentrations of extracellular fluids in striatal cells and the value of dopamine at the same point-in-time, with r2 value as reference the correlation analysis of above two items are processed at the same point-in-time. From the dynamic level, it is systematically clarified its pharmacodynamic behaviors and its treatment functions, effective components and regulatory mechanisms.

帕金森病近年来呈高发趋势，尚无理想根治药物。中医药治疗帕金森病疗效确切、优势明显，已越来越受到国内外研究者的关注。PK/PD模型它是综合阐明药物作用靶部位浓度-效应-时间的三维关系的模型，是未来药物评价的重点。本研究在前期研究的基础上，应用MD及UPLC-Q/TOF-MS技术并结合MSE质谱数据采集模式进行组分复方平颤宁（刺五加总苷、芍药总苷、钩藤总碱）在帕金森模型大鼠纹状体内的PK-PD研究。研究以多巴胺为效应指标，绘制纹状体内刺五加苷B、异嗪皮啶、芍药苷、钩藤碱、异钩藤碱的浓度-时间曲线，利用3P97软件计算药动学参数，根据各成分在综合浓度中的权重系数，求算组分复方综合浓度，进一步整合药动学参数。以相同时间点纹状体细胞外液组分复方综合浓度与多巴胺值做回归性分析，以r2值为参考，作相同时间点两者相关性分析。从动态层次上系统阐明其体内行为及对帕金森病的治疗作用、作用物质及作用规律。

本课题组按照项目任务书的计划要求，已完成全部工作计划。共发表国家核心期刊文章9篇，培养硕士研究生1名，博士研究生1名。. 结题研究内容包括：（1）增加并完成了组分复方平颤宁（复方拜颤停片）的制剂工艺及质量标准研究，此部分内容发表在《中国中医药信息杂志》2016年7 月第 23 卷第 7 期 ；（2）增加并完成了组分复方平颤宁对帕金森病的作用及作用机制研究（整体动物及细胞），此部分内容共发表4篇论文，分别发表在《中国中西医结合杂志》2016年1月第36卷第1期 、《中国中医药信息杂志》2016年4 月第 23 卷第 4 期、《中国中医药信息杂志》 2015 年 12 月第 22 卷第 12 期 及《中国实验方剂学杂志》2015 年 11 月第 21 卷第22 期；（3）完成了6-OHDA致大鼠PD模型的制备与评价；（4）完成了组分复方平颤宁及其组分（刺五加提取物、白芍提取物、钩藤提取物）在正常大鼠纹状体内的PK-PD相关性研究；（5）完成了组分复方平颤宁及其组分（刺五加提取物、白芍提取物、钩藤提取物）在帕金森模型大鼠纹状体内的PK-PD相关性研究；（6）确立了MD、HPLC-ED及UPLC-ESI-MS/MS技术联用用于PK-PD相关性研究的分析方法。. 此项研究在前期研究工作的基础上，采用Western Bolt、RT-PCR、AnnexinⅤ、PI双染流式细胞、MD、HPLC-ED、UPLC-ESI-MS/MS等技术并结合MSE质谱数据采集模式完成了上述结题研究内容。此项研究从整体、细胞及动态层次等多角度系统阐明了组分复方平颤宁的体内行为及对帕金森病的治疗作用、作用机制、作用物质及作用规律，为治疗帕金森病的有效中药制剂组分复方平颤宁的开发奠定了基础。