选择性激动CB2受体治疗类风湿关节炎的实验研究

关节部位炎症和骨质破坏是RA的基本病理特征。新近发现CB2受体主要分布于外周，介导大麻素的免疫抑制作用和破骨抑制作用，提示选择性激动CB2受体可控制RA病情进展。我们发现RA滑膜有CB2受体表达，且在RA发病中起重要作用的炎症因子上调CB2受体的表达；敲除CB2受体基因加重胶原性关节炎的发生。本项目拟通过研究CB2受体选择性激动剂是否有效减轻RA动物模型的关节炎症程度和关节破坏程度、敲除CB2受体基因是否加重RA模型的发生、发展，从正反两个侧面证明CB2受体在RA治疗中的作用。敲除CB2受体基因、CB2受体拮抗剂是否能取消所选激动剂对RA模型的治疗作用，以进一步证实所选激动剂特异性作用于CB2受体。还将初步探索相关机制，如CB2受体选择性激动剂是否抑制滑膜成纤维细胞的增殖、MMPs的产生，及其信号转导途径。通过本课题的研究为寻找治疗RA的新靶点提供科学依据，促进基础研究成果向临床应用转化。

类风湿关节炎（RA）是以慢性、持续性关节滑膜炎症为特征，可导致关节内软骨和骨的破坏，最终导致残疾。其主要的组织病理学特点表现为T淋巴细胞、巨噬细胞样滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞等聚集致关节滑膜增生增厚。Ⅱ型大麻素受体（CB2R）主要表达在外周免疫系统中，由于其激动后不产生中枢神经方面的副作用。本课题旨在探究CB2R能否成为治疗RA的新靶点。.本研究首先采用免疫组化表明在RA患者和骨关节炎（OA）患者的滑膜组织中，巨噬细胞样滑膜细胞和滑膜成纤维细胞均有CB2R蛋白的表达；且CB2R在RA滑膜的表达水平稍高于OA滑膜组织。在原代培养的RA患者的滑膜成纤维细胞中，免疫荧光、免疫印迹和RT-PCR的结果均证明了RA滑膜成纤维细胞也表达CB2R。另外，IL-6、TNF-α和LPS等炎症因子均能够上调滑膜成纤维细胞中CB2R的表达。相对于正常小鼠，在胶原性关节炎(CIA)小鼠的脾脏和肝脏中，CB2R的表达水平显著上调。.采用DBA1小鼠诱导CIA，经1 mg/kg剂量的HU-308慢性治疗可以有效减轻CIA小鼠的关节肿胀程度，延缓关节炎的发生发展；组织学检查结果显示1 mg/kg剂量的HU-308能减轻关节滑膜的病理性增厚，减少关节腔内炎性细胞的浸润；X-光平片和Micro-CT结果均显示HU-308能减轻CIA小鼠关节骨和软骨的破坏程度；且治疗组小鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体的水平明显降低。.为探讨HU-308抑制CIA的作用机制，体外研究发现HU-308可剂量依赖性地抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖、致炎细胞因子的产生；剂量依赖性地抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生致炎细胞因子；剂量依赖性地抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖，以及IL-6、MMP-3和MMP-13的产生。并证明HU-308可抑制细胞内ERK1/2、p38 MAPK的磷酸化。采用CB2R基因敲除小鼠进一步证实HU-308对巨噬细胞和淋巴细胞的作用是由CB2R受体介导的。.结论，RA滑膜中表达CB2R，且炎症可以上调CB2R的表达；特异性激动CB2R可抑制自身抗体的产生，淋巴细胞、巨噬细胞和滑膜成纤维细胞产生致炎细胞因子，从而减轻CIA小鼠关节炎症和关节肿胀程度。这些结果表明选择性CB2R激动剂有可能成为治疗RA的改善病情药物之一。