RET融合基因在非小细胞肺癌中的获得性耐药模型与机制研究

Acquired resistance to tyrosin kinase inhibitor (TKI) remains the major failure for targeted treatment of non-small-cell lung cancer (NSCLC). RET fusion genes is a molecular subset of NSCLC recently described in merely 1-2% NSCLCs, according to the finding ours and others. We further discovered that several multitarget TKI are effective to RET fusions, and established an artificial resistance model harbored RET V804M mutation. Therefore, in this study, we will observed the effect of TKIs like vendetanib on the LC-2/ad cell line, which harbored the RET fusion gene. The resistant clones will be isolated for detection of known resistance mechanisms. The differential espressed gene will be recognized by transcriptome array, and selectively silienced to restore the sensitivity to TKIs.Then the downstream signal pathway will be investigated to find how the discrepant expressed gene wors. This work will be of value in proving the hypothesis that resistance of RET TKI will be acquired during treatment, indicating the plausible mechanism of RET TKI resistance, stratege to overcome this resistance, and providing helpful data to future clinial practice.

导致非小细胞肺癌（NSCLC）对酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗失败的主要原因是获得性耐药的产生。RET融合基因是一种最新发现的NSCLC驱动突变和治疗靶点，并被我们的前期研究证实存在于1-2%NSCLC中。进一步研究中我们发现数种多靶点TKI对RET融合基因有效，并初步建立了一种V804M突变的人工耐药模型。在此基础上，本项目拟采用RET阳性的LC-2/ad肺癌细胞株，观察其对Vendetanib等具有抗RET激酶活性TKI的治疗反应，分离出耐药克隆；检测耐药克隆是否存在常见耐药机制；分析耐药克隆较亲代克隆的基因表达差异；选择性沉默该基因，观察是否可以重塑治疗敏感性，以确定其与耐药的因果关系；结合对下游信号通路的分析，尝试阐明基因异常作用机制。以论证RET融合基因可以在TKI治疗过程中产生获得性耐药的假说，探讨可能的获得性耐药机制和抗耐药治疗策略，为RET阳性NSCLC的临床治疗提供参考。

由于晚近研究提示，个体间异质性可能在很大程度上影响包括RET融合基因阳性肺癌在内的肺腺癌TKI治疗的疗效，本研究重点探索区分包括RET融合基因阳性在內肺腺癌个体间异质性的区分因子 。我们首先完成了1000余对肺腺癌中RET融合基因，以及EGFR、KRAS、ALK等其他致癌基因暨分子靶点的进一步分子分型工作，发现：1)肺腺癌分子分型与肺腺癌IASLC/ATS/ERS联合推出的肺腺癌组织分型存在相关性;2)发现驱动突变的分布与性别、吸烟状况、肿瘤病理亚型、黏液成分等多种因素间存在关联,提出 根据是否伴有黏液成分和吸烟状态等决定驱动突变的检测策略。在此基础上,我们进一步通过“血统基因分析”对200余对肺腺癌的异质性加以分析,发现：1) 以NKX2-1为代表的相关基因表达水平提示肺腺癌良好分化 ； 2) 癌基因突变与线性基因表达间存在关联,例如肺癌KRAS突变常伴MYC高表达;；3) 相关线性基因的表达水平可以独立提示肺腺癌患者预后。这些发现将为进一步准确区分肿瘤异质性，实现更有针对性的靶向治疗提供重要参考。