融合基因S-PSPH在鼻咽癌中临床意义及功能研究

Nasopharyngeal Carcinoma (NPC) is a common malignancy in head and neck carcinoma. Many studies indicated that susceptibility, EB virus infection, and environment play a pivotal role in NPC pathogenesis. Recently most of studies focused on SNPs, in/del in NPC, whereas fusion genes were little investigated in NPC. In our pilot study, RNA transcriptome sequencing was used for screen fusion gene in NPC FFPE samples, and S-PSPH fusion gene in Chromosome 7 was discovered in 6 of 10 FFPE samples. However, the role of this fusion gene remains unclear. This study is aimed to investigate the cell proliferation, cell cycle, apoptosis and metastasis in vivo and in vitro by means of stable construction of S-PSPH fusion gene. We will use real-time PCR and Sanger sequencing to test whether the prognosis, treatment response, and histopathological classification of NPC are related to this fusion gene that will provide a new targeted molecular for individualised medicine in NPC.

鼻咽癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一， 大量的研究表明遗传易感性、EB病毒感染和环境因素在鼻咽癌的发病过程中起着重要作用。绝大多数研究集中在鼻咽癌的SNP分析、缺失/插入等，然而融合基因在鼻咽癌发生发展中的作用还不清楚。我们在前期研究中，应用RNA转录组测序筛选与鼻咽癌相关的融合基因。研究结果发现在6/10个鼻咽癌石蜡样本存在7号染色体S和PSPH融合。该融合基因S-PSPH在鼻咽癌中的临床意义及功能还不清楚。本研究旨在通过构建S-PSPH表达质粒，分别在细胞和动物水平研究该融合基因对鼻咽癌细胞增殖，细胞周期、细胞凋亡、转移的影响；对裸鼠鼻咽癌成瘤能力和转移的影响；采用qPCR技术和Sanger测序分析融合基因S-PSPH对鼻咽癌患者生存预后，放化疗敏感性以及病理形态学方面的相关性。该研究发现将为鼻咽癌患者个性化防治提供新的分子靶点。

鼻咽癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一， 具有极其不平衡的地域分布特点。大量的研究表明遗传易感性、EB病毒感染和环境因素在鼻咽癌的发病过程中起着重要作用。绝大多数研究集中在鼻咽癌的SNP分析、缺失/插入等，然而融合基因在鼻咽癌发生发展中的作用还不清楚。在我们的研究中，应用RNA转录组高通量测序筛选与鼻咽癌相关的融合基因。研究结果发现在6/10个鼻咽癌石蜡样本存在7号染色体SEPT7P2和PSPH融合。采用sanger直接测序法证实了融合基因SEPT7P2-PSPH属于染色体内融合，且上下游基因距离为10.2Mb。我们依据上下游基因的DNA序列各设计15对引物以覆盖上下游基因全长，采用PCR扩增融合基因高表达的鼻咽癌细胞株DNA，PCR结果证实能扩增全长，证实该融合基因没有发生染色体倒位，而是不同转录本之间的顺式剪切方式的新型融合基因。敲低融合基因，转染至细胞系，融合基因低表达的肿瘤细胞增殖能力，克隆形成以及侵袭转移能力均增强（P<0.005）。检测下游基因PSPH在鼻咽癌石蜡组织中表达，Kaplan-Meier分析高表达的鼻咽癌患者的无瘤生存时间和总生存时间均要小于低表达的患者。该研究发现鼻咽癌中一种新型的融合基因类型存在，并且在鼻咽癌的转移中起着促进作用，为鼻咽癌患者的预后预测提供新的分子靶点。