多重耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白成分的抗原性分析

Acinetobacter baumannii (Ab) is one of the important pathological viruses that cause the outbreak infection in hospital. Because of the complicated drug resistant mechanism,little sensitivity to antibiotics and a high mortality, Ab brings great challenge to clinical treatment.Our study will focus on the immunological characteristics of drug resistant Ab, discover a safe and effeicient immunological control strategy other than using of antibiotics in order to avoid the drug resistant mechanism.In our early study, we have obtained Ab outer-membrane vesicle (OMVs).The OMVs immunized antiserum successfully protected mice from virus attraction in hematosepsis and pneumonia disease models, which showed the possibility of using immunized strategy to protect and treat Ab efficiently. In order to further discuss the protection of outer-membrane protein, we used reversevaccinology to predict several components in Ab outer-membrane protein and expressed in vitro. After selected in vitro using immunology strategy, five potential components were obtained. This study will (1) obtain the five purified proteins; (2) identify and analysis the immunogenicity of the predicted proteins in vitro and mouse model; (3) clarify the cross protection of active immunization and passive intervention therapy by immunized antiserum of different outer-membrane components and combination to different Ab pathogenic strains, and to provide a strong technical platform in use of drug-resistant microbials immunization and treatment studies.

鲍曼不动杆菌是目前医院内感染暴发流行的重要病原菌。由于其耐药机制复杂，对抗生素适应快，常显示出泛耐药性，致死率高，给临床治疗带来了极大挑战。本研究致力于利用耐药鲍曼的免疫学特性，从不同于抗生素的作用途径，避开其耐药机制，探索安全、有效的免疫控制策略。课题组前期成功制备了鲍曼外膜囊泡，经囊泡主动免疫及抗血清的被动免疫，在败血症及肺炎模型中成功保护了小鼠感染，显示了经免疫手段提供有效保护及治疗的可行性。为进一步探究外膜蛋白的保护性，课题组利用反向疫苗学预测出多个外膜蛋白成分并进行体外表达，经体外免疫学筛选，获得5个最具抗原性潜力的外膜蛋白，在本研究中将进一步（1）完成这5个蛋白的纯化制备；（2）通过小鼠免疫及体外免疫学检测研究免疫原性；（3）利用鲍曼感染动物模型，考察外膜蛋白或组合作为免疫原在诱导主动免疫保护和被动治疗中的应用潜能，建立反向疫苗学在耐药菌免疫防治研究中应用的有力技术平台。

鲍曼不动杆菌是目前医院内感染暴发流行的重要病原菌。由于其耐药机制复杂，对抗生素适应快，常显示出泛耐药性，致死率高，给临床治疗带来了极大挑战。本课题利用耐药鲍曼不动杆菌的免疫学特性，从不同于抗生素的作用途径，避开其耐药机制，探索有效的免疫控制策略。本课题主要：制备了鲍曼不动杆菌的外膜囊泡（OMV），经OMV主动免疫及抗血清的被动免疫，在败血症及肺炎模型中成功保护了小鼠感染，显示了经免疫手段提供有效保护及治疗的可行性；进一步挖掘组成OMV的外膜蛋白的免疫保护性情况，利用反向疫苗学预测出一些在OMV上的外膜蛋白具有免疫保护性，对这些蛋白进行了体外表达及免疫学筛选，最终获得OmpW及Omp22两个具抗原性潜力的外膜蛋白，通过小鼠体内的鲍曼感染模型，考察了该两个外膜蛋白在诱导主动免疫保护和被动治疗中的应用潜能，获得了初步成功；依据鲍曼不动杆菌OMV的特点，将OMV的应用延伸至大肠杆菌，在大肠杆菌中进行基因改造，成功将鲍曼的Omp22蛋白呈递至大肠杆菌OMV上，形成了新的基因重组囊泡（Omp22-OMV），证明了以OMV作为疫苗载体可以有效的诱导机体产生抗Omp22的抗体，以此提示OMV作为新型疫苗递送系统的潜力，并形成了一种新型的抗鲍曼不动杆菌的疫苗形式。依托本项目，课题组鉴定出了2个候选的鲍曼不动杆菌外膜蛋白的免疫原性；建立了针对耐药菌外膜成分的反向疫苗学预测技术，以及蛋白表达、纯化、分析与鉴定平台；依托鲍曼不动杆菌OMV的研究基础，建立了以大肠杆菌OMV为基础的新型疫苗递送系统，为开发新型疫苗递送系统奠定了基础。