融合蛋白GTH的构建及其在精子转基因系统中作用的研究

以精子作为载体是动物转基因的理想技术，然而，长期以来无法突破外源DNA进入精子内这一关键步骤。本研究依据精子顶体表面存在大量促性腺激素释放激素受体的特点和绿脓杆菌外毒素A转膜区可将外源蛋白跨膜转运至细胞内的特点以及超嗜热古菌组蛋白高度亲和DNA形成复合体的特点，用基因工程手段构建表达具有这三种特性的融合蛋白GnRH-TLD-HphA，该融合蛋白可以将目的基因主动转运至精子内，建立精子-融合蛋白-DNA转基因系统。利用该融合蛋白将报告基因-绿色荧光蛋白基因高效主动地转运至实验动物精子内，经人工授精，子代动物通过核酸探针和免疫组化筛选，获得表达绿色荧光蛋白的转基因动物。研究目的在于建立可以将外源目的基因主动转入精子内的方法，为动物转基因技术探索一种简单易行、高效的途径，促进转基因技术的发展。