HBV cccDNA特异性siRNA介导碘-125标恩替卡韦精准抗乙肝治疗的研究

Recently, the anti-HBV strategies are based on nucleoside analogues to interrupt the reverse transcription of HBV. However, the efficacy of those strategies is unsatisfactory and it tends to recrudesce due to those strategies cannot remove the HBV cccDNA in cell nucleus. This study attempt to make use of siRNA combine with radionuclide to anti-HBV cooperatively. The main contents includes: 1. screening and synthesizing specific siRNA to HBV cccDNA; 2. Labeling entecavir with iodine-125 (125I-ETV) and coupling it to siRNA (125I-ETV-siRNA); 3. Transfering 125I-ETV-siRNA into HepG2.2.15 cell by Chitosan, and setting groups (entecavir, 125I and control group, etc.) to observe HBV gene duplication, transcription and translation, and the radiation effect on cccDNA; 4. Building HBV rat model to assess the anti-HBV efficacy, dose-response relationship and biotoxicity of 125I-ETV-siRNA. The aim of the study is to use a multiple antiviral strategy via taking advantage of siRNA combine with iodine-125 labeled nucleoside analogues to improve anti-HBV efficiency, clear cccDNA in cell nucleus thoroughly, prevent relapse and minimize invasive.

目前抗乙肝治疗的方法用核苷类药物针对病毒逆转录环节进行，但疗效不明显，易反复，主因其无法清除感染肝细胞核内HBV cccDNA。本研究利用siRNA和核素辐射作用，协同抗病毒治疗。研究主要内容包括HBV cccDNA链X基因特异性siRNA筛选与合成、恩替卡韦碘-125标记（125I-ETV）及125I-ETV-siRNA偶联，通过壳聚糖纳米粒转染125I-ETV-siRNA至HepG2.2.15细胞，并设恩替卡韦、125I及空白等对照组，观察HBV基因复制、转录和翻译水平，及cccDNA链辐射毁损效力；构建HBV大鼠模型，评价125I-ETV-siRNA抗HBV效力和剂量-效率关系及其生物毒性。本研究探索siRNA结合核素标记的核苷类药物，多重作用抗HBV病毒策略，提高HBV抑制效率，彻底清除核内cccDNA，预防HBV反复感染，降低HBV危害，具有重要临床意义。

目前抗乙肝治疗的方法用核苷类药物针对病毒逆转录环节进行，但疗效不明显，易反复，主因其无法清除感染肝细胞核内HBV cccDNA。本研究利用siRNA和核素辐射作用，协同抗病毒治疗。研究主要内容包括HBV cccDNA链X基因特异性siRNA筛选与合成、恩替卡韦碘-125标记（125I-ETV）及125I-ETV-siRNA偶联，通过壳聚糖纳米粒转染125I-ETV-siRNA至HepG2.2.15细胞，并设恩替卡韦、125I及空白等对照组，观察HBV基因复制、转录和翻译水平，及cccDNA链辐射毁损效力；构建HBV大鼠模型，评价125I-ETV-siRNA抗HBV效力和剂量-效率关系及其生物毒性。目前已完成药物碘标记及其稳定性实验和部分药物细胞实验，结果显示，本课题设计的碘标记方法打破了以往药物放射性碘标记体内不稳定的症结，将其稳定性由传统的40%-50%提高至85%左右，这将为放射性内照射治疗带来新的希望。药物细胞实验部分结果表明，碘标记药物能有效实现抗病毒治疗目的，并相较于未标记药物，具有更好的效果。本研究探索siRNA结合核素标记的核苷类药物，多重作用抗HBV病毒策略，提高HBV抑制效率，彻底清除核内cccDNA，预防HBV反复感染，降低HBV危害，具有重要临床意义。