Rig-I对造血干细胞细胞周期及造血重建能力的调节作用及机制研究

维持造血干细胞（HSCs）处于细胞周期静息状态 (G0期)可以避免其发生分化或凋亡，从而在生理和应激状态下保持其长期造血重建能力，该机制是近期造血干细胞生物学研究的重点之一。以往的研究工作表明：在调节HSCs 细胞周期及造血重建能力的分子机制网络中，Akt活性是一个重要的结点。在近期的研究工作中，我们发现：1）维甲酸诱导基因（Rig-I）缺陷小鼠表现为HSCs的G0期细胞比例减少，且对化疗药物5-FU的造血细胞清除作用的敏感性显著增强；2）Rig-I是一个至今未报道的调节Akt活性的上游分子。据此，我们在本项目中提出Rig-I可能是体内环境下调节HSCs细胞周期和长期造血重建能力的分子之一，对其分子机制以及在炎症条件下Rig-I如何调控HSCs进行系统和深入的研究，不仅可以丰富对HSCs维持细胞周期静息状态和长期造血重建能力一般机制的理解，也有一定的临床血液学研究价值。

目的：研究Rig-I的缺失对位于模型顶端的造血干细胞功能的影响。 ..方法：以Rig-I敲除小鼠（Rig-I-/-）作为动物模型，通过多色标记流式细胞术对生理条件和理化刺激（电离辐射和化疗药物）条件下Rig-I敲除小鼠和同系野生型小鼠各系造血细胞进行免疫表型和细胞周期的检测分析。进一步利用细胞分选技术分选得到的纯化造血干细胞进行竞争性造血干细胞移植实验，定时检测受体小鼠外周血细胞的重建比例，用来评估造血干细胞重建造血的自我更新能力。同时，利用MEF细胞系等体外系统，采用敲低和过表达Rig-I，鉴定Rig-I在损伤反应过程中参与的调控机制..结果：流式细胞术结果显示Rig-I的缺失增加了造血干细胞的数量，并且扰乱了造血干细胞的静息状态。通过造血干细胞移植实验，显示Rig-I缺失明显降低了造血重建的比例。另外，与同系野生型小鼠相比，Rig-I敲除小鼠对基因毒性的处理较为敏感，伴随生存率的下降，甚至是造血干细胞的耗竭。Westernblot和RT-PCR结果表明Rig-I参与了DNA损伤反应的调控。..结论：我们的结果阐明了Rig-I 通过参与调控DNA损伤反应通路维持造血干细胞的功能。