基于"痰、瘀、虚"理论的中医药干预肝纤维化肝窦毛细血管化机制研究

The intervention of hepatic fibrosis is the focus of prevention and treatment on cirrhosis.According to traditional Chinese medicine, that "retention of phlegm and blood stasis in meridian, deficiency of vital Qi" is the basic pathogenesis of this disease. Based on preliminary studies, we choose the therapy methods of reduce phlegm, promoting blood circulation to remove blood stasis, strengthening the body resistance. Therefore the experiment was divided into three groups, respectively.The experiment including animal tests and cell cultures, to intervene rats model of liver fibrosis and rat hepatic stellate cell lines(HSC-T6), by testing expression of Angiopoietin-1mRNA, Angiopoietin-2mRNA, Tie-2mRNA, VEGF mRNA and Coⅳ, LN,HA， α-SMA,CD44，TNF-α,liver ultrastructure, combined cycle distribution and apoptosis of rat hepatic stellate cells. From the perspective of intervening hepatic sinus capillaries, furthering the research of related chinese herbs groups' target of anti-liver fibrosis and the mechanism research, discussing its major role and its mechanism in exploring the cell biology support for its basic pathogenesis,deepening the cognition of Phlegm and blood stasis resistance, vital qi deficience and providing experimental basis for the therapy of anti-hepatic fibrosis on phlegm,blood stasis and qi deficiency.

肝纤维化的干预阻断是肝硬化防治工作的重点。我们基于中医有关本病"痰瘀阻络、正气不足"基本病机的认识，从 "化痰、活血化瘀、扶正"角度入手，在前期研究的基础上，拟以"化痰活血扶正方"为载体，通过将其拆方为化痰药组、活血化瘀药组、扶正药组，分动物实验和细胞培养两部分对肝纤维化大鼠模型及大鼠肝星状细胞系HSC-T6进行干预。通过检测Angiopoietin-1mRNA、Angiopoietin-2mRNA、Tie-2 mRNA、VEGF mRNA、bFGFmRNA表达，CoⅣ、LN、HA、α-SMA、CD44、TNF-α、肝脏超微结构，结合鼠肝星状细胞周期分布和凋亡情况,进一步从干预肝窦毛细血管化角度入手，对相关药组抗肝纤维化的作用靶点及相关机制进行研究；寻求肝纤维化基本病机的细胞分子生物学支持，深化本病"痰、瘀、虚"基本病机理论实质的认识，为肝纤维化从"痰、瘀、虚"论治提供理论指导和实验依据。

本研究基于肝纤维化“痰瘀阻络、正气不足”基本病机认识，以“化痰活血扶正方”为载体，将其拆方为化痰组、活血化瘀组、扶正组、全方组，从 “化痰、活血化瘀、扶正”等角度入手，通过动物和细胞培养实验探讨“化痰、活血化瘀、扶正”等各自抗肝纤维化的主要作用及其初步机制。研究结果如下：.1.动物实验.1.1 拆方后各组不同剂量疗效优选实验。.以各治疗组不同剂量对大鼠肝纤维化模型干预治疗8周，通过观察肝功能、肝纤维化指标、VEGFmRNA、TGF-β1mRNA、Angiopoietin-1 、Angiopoietin-2/Tie-2 mRNA、α-SMA、FN平均光度值、 胶原面积百分比等指标优选出TZ(化痰中剂量组)、XZ(活血化瘀中剂量组)、FZ（扶正中剂量组）、QG（全方高剂量组）为疗效最优组。.1.2 各优选组抗肝纤维化的动态研究。.以优选出的TZ、XZ、FZ、QG干预大鼠肝纤维化模型，分别于4W、8W、12W取材检测相关指标，结果如下：.① 各组在不同时间点能明显降低VEGFmRNA 、 TGF-β1mRNA 、 Angiopoietin-1、Angiopoietin-2、Tie-2 mRNA 的表达。.② 各组在不同时间点能明显降低CoⅣ、LN、HA 胶原的沉积；明显降低α-SMA 、CD44、TNF-α蛋白的表达。.③不同时间点各组大鼠肝组织均较同期模型组大鼠在炎细胞浸润程度、变性坏死、纤维增生、改善肝窦毛细血管化等方面有明显减轻，表明化痰活血扶正各药组能够减缓或阻断肝纤维化的进展。.④各治疗组可改善肝纤维化组织超微结构而影响肝纤维化病变进程。.2. 细胞培养.① 全方、活血化瘀及化痰的中、高剂量组含药血清均能不同程度抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6的增值。.②全方、活血化瘀、化痰的中、高剂量组及扶正高剂量组含药血清均可促进大鼠肝星状细胞系HSC-T6的凋亡。.③全方、活血化瘀中、高剂量组及化痰高剂量组含药血清通过将细胞抑制在S期，从而起到抑制其增值和促进其凋亡的。. ④全方及活血化瘀组的中、高剂量组含药血清可显著降低Bcl-2表达，增加Bax表达。.综上所述，“化痰活血扶正方”拆方后的各治疗组主要是通过调节相关细胞因子、抑制HSC的活化、促进细胞凋亡、减少细胞外基质的形成，抑制血管生成因子的分泌、抑制肝窦毛细血管生成，进而起到抗肝纤维化作用的。